左归丸优选方不同极性部位治疗免疫性POF小鼠药效部位追踪

摘要

目的：
　　采用免疫性卵巢早衰（POF）小鼠模型筛选左归丸优选方的有效作用部位。
　　方法：
　　采用水煮浓缩的方法得到左归丸全方干浸膏（Zq）及优选方的干浸膏（Zx）。对左归丸优选方水提液采用水提醇沉的方法获得左归丸优选方醇沉部位（Zx1），并对醇溶部分浓缩，获得左归丸优选方醇溶部位（Zx2）。对醇溶部位分别采用环己烷和乙酸乙酯进行萃取，得到左归丸优选方环己烷部位（Zx3）及乙酸乙酯部位（Zx4）。
　　采用透明带多肽3（ZP3）建立免疫性POF小鼠模型，按照体重随机分为模型对照组，阳性对照组，左归丸全方组、优选方组及其4种不同极性部位组，另设阴性对照组，10只/组，灌胃给药6d/周，共4周。每天进行阴道脱落细胞涂片分析小鼠动情周期变化，每周称重，分析体重的变化情况。实验结束，眼底静脉丛采血，离心取血清，放免法检测血清 FSH、E2水平。无菌取卵巢，用10％中性甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，观察卵巢病理改变；按照TUNEL细胞凋亡试剂盒检测卵巢颗粒细胞凋亡率；采用免疫组化的方法，分析凋亡蛋白Fas、FasL、GDF-9、BMP-15的表达情况。
　　结果：
　　1.各提取成分得率：Zq、Zx，Zx1、Zx2、Zx3和Zx4得率分别为67.48%、57.75%、20.90%、26.08%、0.13%、0.34%。
　　2.动情周期：与模型对照组比较，阳性对照组，Zq、Zx组、Zx1组动情周期具有统计学差异（P<0.01，P<0.05）。
　　3.体重：各组体重无差异（P>0.05）。
　　4.血清FSH、E2：Zx4和戊酸雌二醇均可引起免疫性POF小鼠FSH水平显著下降（P<0.01）；Zx、Zx1，戊酸雌二醇均可升高免疫性POF小鼠E2水平（P<0.05，P<0.01）；
　　5.卵巢HE：模型对照组原始卵泡数量较阴性对照组少，成熟卵泡少，0~1个，卵泡颗粒细胞较阴性对照组排列紊乱。卵泡形态不规则，向邻近的间质延伸，400倍放大可见较多破碎的颗粒细胞凋亡小体。各治疗组原始卵泡和成熟卵泡的数量多于模型对照组，颗粒细胞的排列较模型对照组略整齐。
　　6.卵巢颗粒细胞凋亡率：Zx、Zx2、戊酸雌二醇可降低免疫性POF小鼠的卵巢颗粒细胞凋亡率（P<0.05）。
　　7.卵巢凋亡蛋白Fas、FasL、GDF-9、BMP-15：
　　与阴性对照组相比，模型对照组小鼠Fas蛋白的表达量降低（P<0.05），FasL的表达量显著升高（P<0.01），GDF-9表达量降低（P<0.05），BMP-15蛋白表达量降低（P<0.01），Zx1、Zx2组BMP-15的表达量也降低（P<0.01，P<0.05），其余治疗组与阴性对照组无统计学差异（P>0.05）。
　　与模型对照组比，Fas蛋白：阳性对照组、Zx1及Zx4组Fas蛋白的表达量升高（P<0.05），Zq，Zx及Zx3组Fas蛋白的表达量显著升高（P<0.01）；FasL蛋白：阳性对照组、Zx2及 Zx4组卵巢 FasL表达量显著下降（P<0.01），Zx、Zx1及Zx3组的表达量也下降（P<0.05）；GDF-9蛋白：戊酸雌二醇、Zq可增加免疫性POF小鼠卵巢GDF-9表达量（P<0.05），Zx及Zx4可显著增加GDF-9在卵巢的表达量（P<0.01）；BMP-15蛋白：戊酸雌二醇、Zq、Zx、Zx3、Zx4组BMP-15表达量显著增加（P<0.01），Zx2组BMP-15表达量也增加（P<0.05）。
　　结论：
　　左归丸优选方治疗免疫性POF的作用优于左归丸全方，4种不同极性部位均为有效作用部位，左归丸治疗免疫性POF是其不同极性部位综合作用的结果。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

1. 免疫性卵巢早衰的发病率及危害

2. 免疫性卵巢早衰的病因、诊断及治疗方法

3. 中医治疗免疫性POF的理论依据

4. 左归丸方剂分析及左归丸优选方的筛选

5. 免疫性POF动物模型

6. 本课题的研究目的及意义

技术路线

第一部分 左归丸全方、优选方及其不同极性组分的提取

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨 论

第二部分 左归丸优选方不同极性部位治疗免疫性POF小鼠药效研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨 论

结语

一、结论

二、不足与展望

参考文献

综述:卵巢早衰的治疗现状

致谢

附录一

附录二

附录三

附录四

附录五

附录六

附录七

附录八

附录九

附录十 已发表论文