雄激素诱导毛囊干细胞内皮脂腺细胞分化的初步研究

摘要

毛囊隆突区(bulge region)是毛囊干细胞的主要栖息地，最近实验证实隆突区干细胞不仅能迁移产生皮脂腺和表皮，而且能迁移产生新的毛囊。 皮脂腺细胞的生长和分化受视黄醛衍生物(retinoid)、激素(hormones)和细胞因子(cytokines)的调控。雄激素对皮脂腺细胞的发育成熟以及皮脂的合成分泌具促进作用。雄激素受体是一种配体依赖性的转录调节蛋白，参与雄激素激发的各种生理功能的调节。据文献报道，在人的皮脂腺(sebaceous gland,SG)的基底层和毛囊外根鞘(outer rootsheath，ORS)中均有雄激素受体的表达。 为了探索雄激素对毛囊干细胞定向分化为皮脂腺细胞的过程是否具有促进功能，我们进行了如下的实验来进行研究： 第一步，检测了在毛囊周期的三个不同时期(生长期、退化期和静止期)中大鼠触须毛囊干细胞中AR、ARmRNA的表达以及检测原代培养的毛囊干细胞中AR的表达并探讨意义，为进一步研究打下基础。 第二步，在体外培养毛囊干细胞并检测了AR、K15、CD34以及β1-integrin的表达。 第三步，将培养细胞分成诱导组和对照组： ①诱导组细胞：改用添加了雄激素的诱导培养基来培养，以此诱导体外培养的毛囊干细胞向皮脂腺细胞的定向分化，检测上皮膜抗原(epithelial membrane antigen，EMA)和脂滴在诱导细胞中的表达； ②对照组细胞：作对照，仍继续用未添加雄激素的培养基进行培养，检测上皮膜抗原(epithelial membrane antigen，EMlA)和脂滴在对照细胞中的表达。 方法： 采用免疫组织化学技术检测AR、K15、CD34、β1-integrin以及EMA的表达。采用油红O组织化学染色技术检测脂滴的形成情况。采用RT-PCR检测AR mRNA的表达。在体外用添加了雄激素的培养基来诱导毛囊干细胞向皮脂腺细胞定向分化。 结果： 1．在体情况下，生长期、退化期和静止期大鼠触须毛囊干细胞中均有AR表达。 2．AR在生长期呈强表达，而在退化期和静止期表达微弱；AR mRNA在生长期呈强表达，而在退化期和静止期表达微弱；AR表达变化趋势与AR mRNA表达变化趋势一致。AR表达变化趋势与毛囊干细胞的增殖分化能力呈一致性。 3．体外情况下，培养的毛囊干细胞中有AR、K15、CD34和β1-integrin的表达。 4．用免疫细胞化学检测到诱导后的细胞中EMA的表达呈阳性，而未经诱导处理的细胞表达呈阴性；用油红O染色检测到诱导后的细胞中有脂滴的形成，而在未经诱导的细胞中没有脂滴的形成。 结论： 1．大鼠触须毛囊隆突区在整个毛囊周期中均有AR表达，是雄激素作用的靶组织。体外培养的毛囊干细胞亦是AR靶细胞并能较好地保持了其干细胞性。 2．AR和AR mRNA在毛囊周期中呈规律性表达，AR表达变化趋势与AR mRNA表达变化趋势一致。AR表达变化趋势与毛囊干细胞的增殖分化能力呈一致性。 3．用免疫细胞化学检测到EMA在诱导后的细胞中的表达呈阳性，而在未经诱导处理的细胞中的表达呈阴性；用油红O染色检测到诱导后的细胞中有脂滴的形成，而在未经诱导的细胞中没有脂滴的形成；表明雄激素对毛囊干细胞向皮脂腺细胞定向分化具有促进作用。

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摘要

前言

第一部分雄激素受体在毛囊中的原位表达的初步研究

引言

材料与方法

结果

讨论

小结

第二部分雄激素诱导毛囊干细胞向皮脂腺细胞分化的初步研究

引言

材料与方法

结果

讨论

小结

致谢

参考文献

文献综述：雄激素受体的作用机制及其诱导细胞分化功能的研究进展

研究生期间撰写发表的文章