BDNF在抑郁症病程中的变化及其对神经发生影响的实验研究

摘要

目的：
　　 1、建立和优化BDNF的检测手段并观察其在正常人群和抑郁症患者体液中的浓度,并探讨BDNF的变化与抑郁症发生、严重程度以及临床治疗反应的关系。
　　 2、观察BDNF在抑郁症实验大鼠模型脑内海马等结构的改变及脑内注射BDNF后海马区神经前体细胞的变化,并观察体外BDNF对神经干细胞定向单胺类神经元分化的影响。
　　 方法和结果
　　 1、抑郁症患者血清及脑脊液中BDNF的检测:收集正常健康人88例和抑郁症患者42例的血液及脑脊液样本,离心后取上清测定血清及脑脊液中BDNF的浓度。BDNF检测采用改良ELISA法,将BDNF单克隆抗体进行固化处理。结果显示:不同程度抑郁症患者体液中BDNF的水平均明显低于正常人群,相差非常显著,且病情越严重下降越明显,有效的抗抑郁治疗伴随有BDNF的明显升高。
　　 2、抑郁动物模型的建立及BDNF对海马区微管相关蛋白Doublecortin表达的影响:采用大鼠强迫性游泳(行为绝望)和慢性温和的不可预知性应激进行造模。将24只大鼠按随机分为3组(正常对照组、应激组和应激+给药组);应激组和给药组分别进行慢性应激,神经行为学观察显示其产生明显抑郁行为;在第28天时,给药组给予侧脑室注射BDNF(0.5μg),一周后处死大鼠。检测脑组织中BDNF的表达特别是海马区Doublecortin阳性细胞改变。结果显示:应激组海马区和皮质BDNF表达均低于空白对照组,在给予BDNF脑内注射后有所增加。应激组海马区域DCX阳性细胞数明显低于正常对照,BDNF能促进大鼠海马区域DCX阳性细胞数明显增多,与未注射组存在明显差异(P＜0.05)。
　　 3、神经干细胞分离培养与BDNF对神经干细胞分化的影响
　　 取胎鼠大脑皮层组织,以无血清培养技术分离培养神经干细胞,并获得免疫细胞化学鉴定。在血清诱导分化过程中,BDNF处理组细胞生长分化更为旺盛迅速,死亡细胞较少,突起更为致密。BDNF处理能明显增加分化后Tuj-1阳性细胞数量,诱导分化5天后Tuj-1阳性细胞百分率在对照组为7.8％±1.65％,BDNF处理组为20.1±6.4％,tuj-1阳性细胞的突起数在BDNF处理组也明显高于对照组。
　　 同时BDNF处理能显著增加分化细胞群体中酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量,分化第5天TH阳性细胞率在对照组为1.4±0.3％,BDNF处理组为3.7±0.6％,提示BDNF能促进神经干细胞定向多巴胺能神经元的分化。分化第7日也呈现相似趋势。
　　 结论
　　 1.抑郁症患者血清和脑脊液中BDNF水平显著降低,并且和疾病的严重程度相关。抑郁的有效治疗伴有BDNF水平的回升恢复。
　　 2.通过强迫性游泳和慢性应激的方法建立抑郁症动物模型是稳定的,体液中和脑组织中BDNF在应激组均较对照组明显降低,在经BDNF治疗后,脑组织特别是海马区Doublecortin阳性细胞数量明显增加。提示神经发生特别是前体细胞迁移增加。
　　 3、在体外培养神经干细胞体系,BDNF可显著促进神经干细胞定向单胺类神经元的分化;这可能是其抗抑郁作用的重要细胞分子基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词表

前言

第一部分 抑郁症患者血清及脑脊液中BDNF的检测

资料与方法

结果

讨论

结论

第二部分 BDNF在实验性抑郁症的变化及其对神经干细胞分化的影响

材料与方法

结果

讨论

全文总结

致谢

照片

参考文献

文献综述 脑源性神经营养因子的研究现状及进展

参考文献

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