RNA解旋酶p68在创伤愈合中的作用及机制研究

摘要

创伤修复是一个复杂,但是受到严密调控的过程。组织损伤后炎性细胞经过破损的毛细血管迁移至创伤部位,分泌多种细胞因子,启动并激活修复细胞(包括真皮多能干细胞,血管内皮细胞和表皮细胞)增殖、迁移和分化。影响创伤愈合的因素很多,其中修复细胞是创伤修复的关键,细胞功能受到基因表达的精确调控,而细胞基因表型的变化受到RNA网络(包括RNA组和RNA调控元件)的精密调控。创伤修复的核心问题是修复细胞的功能调控。目前对于创伤修复具体的分子机制还有待于深入研究。
　　 RNA解旋酶p68在进化过程中高度保守,是一个依赖ATP的RNA解旋酶,是细胞转录过程中必需的核转录激活因子,在转录、翻译、核糖体生物发生、RNA传递等众多生物过程中起调控作用。RNA解旋酶p68在细胞增殖和器官发育、成熟过程中发挥重要作用。RNA解旋酶p68在分裂的细胞表达较强,在细胞中的表达分布与细胞周期密切相关。P68过表达会导致细胞出现恶性转化,而且p68在结直肠癌、前列腺癌等肿瘤中出现过量表达,且在肿瘤恶转过程中表达逐渐升高,p68的表达水平高低与肿瘤的恶变、转移密切相关。以往有研究揭示在创伤后早期p68在表皮细胞的表达下调,但是对其在创伤修复中的作用尚未完全阐明。
　　 本课题重点研究RNA解旋酶p68在创伤修复过程中的作用及调控的分子机制。通过免疫组织化学技术比较不同发育阶段的大鼠皮肤、单纯切割伤和放创复合伤创面组织中p68蛋白的表达特点,同时检测临床上患者增生性瘢痕和鳞癌标本等异常修复组织中的表达开展对照研究,以揭示其在创伤修复中作用及意义。进一步以三种主要修复细胞(真皮多能干细胞、血管内皮细胞和表皮细胞)为对象,研究早期伤口液对其p68表达的影响;通过RNAi技术研究p68在三种细胞增殖和迁移中的作用及其调控分子的变化特点,得出如下结果和结论:
　　 1.p68蛋白在皮肤中的表皮和真皮中均有广泛表达,其表达强度随发育过程逐渐下降。生后1天呈高表达,随后生后4天、10天逐渐下降,生后60天以后未检测到表达,说明p68表达与发育过程演进具有相关性。
　　 2.应用大鼠皮肤切割伤和放创复合伤模型,组化检测创面组织发现,创伤后,p68表达激活并上调;放创复合伤后,伤口愈合延迟,p68表达出现延迟,提示p68在难愈创伤修复启动延迟发挥作用。
　　 3.发现p68蛋白在增生性瘢痕和鳞癌标本中呈现异常高表达,且表达水平与鳞癌转移相关,首次提出p68异常表达在鳞癌发生发展中的潜在临床意义。
　　 4.通过体外实验发现p68的表达水平与细胞所处的增殖状态相关,增殖旺盛的细胞p68表达水平较强,在进入平台期后表达下调;伤后早期的伤口液能明显促进三种细胞(真皮多能干细胞、血管内皮细胞和表皮细胞)增殖和迁移,并诱导p68蛋白在三种细胞中表达升高。
　　 5.采用RNAi下调p68表达后,细胞形态无明显变化,但是细胞的增殖和单层细胞划痕的愈合速度(cell scratch closure rate)均明显下降,且增殖相关分子PCNA表达下调,磷酸化p53表达上调。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩写一览表

前言

第一部分 RNA解旋酶p68在创面愈合过程中表达特点及其意义

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分 RNA解旋酶p68对修复细胞功能的调控作用及其机制

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

全文总结

致谢

文献综述 RNA helicase p68 in cell living:The two sides of the same coin

硕士在读期间发表论文