青刺果油体外抑制前列腺癌细胞增殖的初步研究

摘要

背景：
　　青刺果（Prinsepia utilis Royle）为蔷薇科（Rosaceae）扁核木属（Prinsepia）野生植物，纳西族、藏族群众和摩梭人视其为“吉祥树”和“百花之王”。青刺果油，是从青刺果的干燥成熟果实中提取得到的脂肪油，其作为一种特殊食用油在民间已使用多年，被普遍用于医疗保健、护肤、美容等方面，效果非常灵验。气相色谱联合质谱（GC-MS）的检测分析结果表明，青刺果油中主含不饱和脂肪酸油酸、亚油酸，总含量高达75％以上，而油酸、亚油酸的抑瘤活性均已被证实。癌症是严重危害人类生命财产安全的恶性疾病之一，随着科技进步，人类生活水平的提高，越来越多人被查出患有癌症。前列腺癌（prostate cancer。PCa）是癌症的一种，也是当今社会男性人口的主要死亡原因之一。在西方发达国家，前列腺癌的发病率和死亡率位居癌症人群第二，仅次于肺癌。在中国，随着我国进入老龄化社会步伐加快，前列腺癌的患病人数呈现逐年递增的趋势。
　　目的：
　　本课题选用青刺果油进行药物实验，将其作用于各类肿瘤细胞，研究其对肿瘤细胞的增殖抑制作用，并就抑制作用最强的前列腺癌细胞PC-3进行深入实验，研究青刺果油抑制肿瘤细胞增殖的作用机制，以期为青刺果油抗癌生物功能的开发奠定一定的理论基础，并对青刺果油体外抗前列腺癌的研究提供实验基础和一定的借鉴意义。方法：
　　本实验选用CO2超临界流体萃取法提取的优质青刺果油为研究对象，体外培养肿瘤细胞，分为实验组和对照组，根据预实验结果将实验组中青刺果油的浓度设为25、50、100、200、300、400、500μg/mL，对照组加入0.1%的DMSO，其余条件与实验组完全一致。将实验组和对照组放于5%CO2、37℃恒温培养箱中作用48 h，利用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测青刺果油对肿瘤细胞增殖抑制作用的影响；在倒置显微镜下观察不同浓度青刺果油对PC-3细胞生长形态的影响；利用流式细胞仪（FCM）检测分析青刺果油处理前后PC-3细胞的周期变化；应用蛋白免疫印迹（Western Blot）实验检测实验组和对照组PC-3细胞内周期调控相关蛋白的表达。
　　结果：
　　1、MTT法研究表明，青刺果油对多种肿瘤细胞的增殖均具有抑制作用，其中作用较强的有前列腺癌细胞PC-3、结肠癌细胞CT-26和乳腺癌细胞MDA-MB-453，三者的IC50值分别为285μg/mL、277μg/mL、339μg/mL；青刺果油作用于PC-3细胞24 h、48 h、72 h的IC50值分别为46 mg/mL、285μg/mL、120μg/mL，且呈现明显的剂量-时间依赖效应。
　　2、倒置显微镜下可见青刺果油能破坏细胞的正常形态，显示加药组细胞皱缩，折光性变弱，胞质中出现较多颗粒或脂滴，且随着给药浓度的上升，异形细胞逐渐增多，越来越多膨大、不规则形细胞即死细胞开始出现。
　　3、流式细胞仪分析显示随着青刺果油浓度的增加，S期细胞逐渐增多，G0/G1期和G2/M期逐渐减少，与DMSO对照组相比较，青刺果油各加药浓度组差异均有统计学意义（P<0.01）。
　　4、免疫印迹实验（Western Blot）结果显示随着青刺果油浓度增加，PC-3细胞内细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK2的表达减少，与DMSO对照组相比存在显著性差异（P＜0.05）。
　　结论：
　　青刺果油对多种肿瘤细胞均有增殖抑制作用，对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3的作用尤强。其增殖抑制作用可能是通过下调细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK2的表达，从而影响PC-3细胞的周期分布，将细胞阻滞于S期，减少其在G0/G1和G2/M期的分布，影响DNA的合成和复制，从而抑制细胞分裂和增殖。