我国近10年肺结核发病率分析及结核分枝杆菌快速检测方法研究

摘要

目的:
　　1.以省级行政区域为研究对象，建立2004-2012年全国31个省（自治区、直辖市）肺结核地理信息数据库，制作肺结核发病的专题地图，并描述我国肺结核发病在时间、地点、人群的“三间分布”特征，确定2004-2012年我国肺结核高发区、高发期和高危人群，为部队肺结核防控关键技术研发提供依据。
　　2.筛选结核分枝杆菌特异性的基因作为LAMP检测的靶基因序列，设计并筛选特异性的引物，用检测浊度法和钙黄绿素染色法对该引物的特异性与灵敏性测试，为部队结核病现场快速检测提供一种新的检测与判断方法。
　　方法:
　　1.近10年肺结核发病率分析
　　1.1.数据收集和处理的方法
　　利用中国疾病监测信息报告管理系统，收集研究区域内肺结核网络报告数据和人口信息，利用Excel2010软件，对数据进行比对筛选和排序整理。
　　1.2利用ArcGIS9.0软件，建立我国各省结核地理信息数据库，从时间、空间、人群三方面，对我国结核发病分布特征进行描述性分析。
　　2.结核分枝杆菌快速检测方法研究
　　2.1引物筛选
　　通过NCBI在线数据库的检索，选择结核分枝杆菌的特异性保守序列IS6110为靶序列，并针对这一序列用软件(PrimerExplorer4)设计特异性的LAMP引物，并筛选最佳引物。
　　2.2特异性评价
　　用筛选的最佳引物分别检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌，评价该引物检测结核分枝杆菌的特异性。
　　2.3灵敏性评价
　　将提取的结核分枝杆菌DNA进行10倍梯度稀释，用该引物进行检测，评价其灵敏性与传统PCR方法的差异。
　　结果:
　　1.近10年肺结核发病率分析
　　1.1全国肺结核发病概况
　　2004-2012年我国31个省、直辖市和自治区，共报告肺结核发病病例9663，728例，死亡26，932例，十年来我国肺结核病例报告总体呈下降趋势。
　　1.2全国肺结核空间分布情况
　　新疆肺结核年均发病率为181.42/10万居全国首位，贵州、海南、广西、重庆、西藏、黑龙江六省（直辖市、自治区）年均发病率次之，北京、山东、上海和天津四省（直辖市）年均发病率低于50/10万。
　　1.3全国肺结核时间分布情况
　　从2004-2012年我国肺结核月均发病率来看，一、二季度肺结核发病率较高，三、四季度肺结核发病率较低，其中，1月和3月发病率较高且相近，自3月份起发病率逐月下降，12月发病率为一年中最低。
　　1.4全国肺结核人间分布情况
　　肺结核患者中男性高于女性;从年龄分布上看，14岁以下人群年均发病率较低，老年人（60岁以后）年均发病率最高。从职业分布上看，我国肺结核发病主要以农民为主。
　　2.结核分枝杆菌快速检测方法研究
　　2.1最佳引物筛选
　　以结核分支杆菌IS6110基因序列为靶序列，设计5套LAMP引物为反应引物，以结核分枝杆菌为模板在浊度仪中进行LAMP反应，结果显示引物JH164组为最佳扩增引物。
　　2.2JH164引物检测结核分枝杆菌的特异性检测实验
　　用JH164引物对14种细菌DNA进行检测，结果显示，JH164引物具有良好的特异性。
　　2.3JH164引物检测结核分枝杆菌灵敏性实验
　　用JH164引物分别用浊度法和钙黄绿素染色法进行检测，检测10倍梯度稀释的结核分枝杆菌DNA，结果显示，用JH164引物进行LAMP结核分枝杆菌检测的灵敏性是传统PCR方法的10倍，最低检测值为:101pg/μl。
　　结论:
　　1.在过去的10年，我国肺结核发病率呈总体下降趋势，但防控形势依然严峻。我国肺结核病在新疆发病率最高，提示该地区结核病防控应作为重点。从发病时间来看，我国肺结核发病多集中在一、二季度，提示此时为结核病多发季节，应做好结核病防控措施。从人群角度来看，肺结核患者多为务农者，以男性为主，老年人发病率较高。
　　2.用LAMP方法检测结核分枝杆菌具有简单、快速、特异性高、灵敏性好的特点，而且反应在恒温状态下即可发生，反应成本低，是一种非常适用于基本部队的结核分枝杆菌快速检测技术，如果使用钙黄绿素染色法，在其反应结果判断方面则更为简单，对结核病疫情的早期控制和结核病患者的早发现、早诊断、早治疗具有十分重要的意义。

目录

声明

缩略语表

摘要

第一章 前言

第二章 近10年肺结核发病率分析

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 结论

2．4 讨论

第三章 环介导的恒温扩增法快速检测结核分枝杆菌的研究

3．1 材料与方法

3．2 结果

3．3 讨论

全文结论

本研究的创新点与不足

参考文献

文献综述 结核分枝杆菌检测方法研究进展

研究生期间发表和待发的论文

致谢