雪菊质量评价研究

摘要

雪菊为菊科植物两色金鸡菊（Coreopsis tinctoria Nutt.）的干燥头状花序，具有降血压、降血脂、抑制高血糖的作用。目前雪菊药材质量评价方法及标准的欠缺，制约了雪菊的开发及应用。本论文通过生药学研究、活性成分含量测定、高效液相色谱（HPLC）指纹图谱分析等方面研究工作的开展，旨在为雪菊药材质量标准的建立提供依据。主要研究方法和结果如下：
　　方法：
　　1、生药学研究：收集了20批雪菊药材进行初步性状鉴别、显微鉴别研究，建立了以绿原酸、木犀草素为指标成分的薄层色谱鉴别方法：（1）在聚酰胺薄膜上，以36％乙酸为展开剂，紫外灯下365nm处检测绿原酸成分；（2）硅胶G板上在环己烷-乙酸乙酯-甲酸（3:5:0.5）系统中展开，AlCl3显色，365nm下检测木犀草素成分。
　　2、总黄酮含量测定：以总黄酮提取量为指标，通过 Box-Behnken响应面法考察乙醇体积分数、料液比、超声时间和温度对总黄酮提取量的影响。筛选了雪菊总黄酮成分的最佳提取工艺，测定了总黄酮含量。
　　3、绿原酸、木犀草素HPLC测定：使用Agilent TC-C18（4.6mm×250mm,5μm）为色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸水为流动相，流速1.0mL，柱温30 ℃，检测波长分别为328、350nm，对20批药材两种活性成分含量进行了测定并比较分析。
　　4、雪菊药材指纹图谱分析方法：采用 HPLC建立雪菊的指纹图谱，用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（A）版建立指纹图谱共有模式并进行相似度计算，用SIMCA-P11.0软件建立PLS-DA模型分析新疆、云南雪菊质量差异。
　　结果：
　　1、雪菊药材舌状花单轮，黄色花瓣8枚；基部或中下部红褐色，管状花紫褐色。总苞片2层，内层长于外层；粉末的显微特征可见不定式气孔、花粉粒、薄壁细胞、导管、纤维、分泌道、花冠表皮细胞。薄层色谱鉴别可见不同产地药材在对照品位置有相同斑点，表明药材中都含有绿原酸、木犀草素成分。
　　2、雪菊总黄酮最佳提取工艺为乙醇体积分数65%，料液比40g/mL，超声时间34min，超声温度62 ℃。含量测定结果表明：雪菊药材中总黄酮的含量范围为177.06～254.85mg/g。
　　3、HPLC测定结果表明：绿原酸在浓度9.9～99.0μg/mL时与峰面积的线性关系良好，回归方程：y=13402x-652.38（R2=0.9998）。平均回收率为100.66%（n=6）。RSD为1.79%；木犀草素在浓度0.97～19.40μg/mL与峰面积的线性关系良好，回归方程：y=27343x+4401.2（R2=0.9999）。平均回收率为98.89%（n=6），RSD为1.71%。该方法准确、灵敏，重复性良好，可用于雪菊绿原酸、木犀草素的含量测定。不同产地雪菊绿原酸、木犀草素含量有差异，两成分的含量范围依次为0.93～3.91mg/g，0.61～1.32mg/g。
　　4、雪菊药材指纹图谱结果表明：指纹图谱具有17个共有峰，通过对照品指认出绿原酸、木犀草素2种成分。进一步进行相似度分析，20批样品相似度计算结果在0.942～0.992，相似度较高。结合PLS-DA得分图分析，新疆、云南雪菊被分为2类，其质量具有明显差异。通过载荷图和PLS-DA变量重要因子分布图可得出对分类贡献最重要的11种差异标志物，可作为质量控制的有效指标。

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前言

第一章 雪菊文献研究进展

1.1 雪菊化学成分研究

1.2 药理作用

1.3 雪菊质量评价研究

1.4 论文立题依据及意义

第二章 雪菊生药学研究

2.1 材料与仪器试剂

2.2 雪菊性状、显微观察

2.3 雪菊药材薄层色谱鉴别

2.4 讨论

第三章 响应面法优化雪菊总黄酮提取工艺及总黄酮含量测定

3.1 材料与仪器试剂

3.2 方法与结果

3.3 讨论

第四章 雪菊中绿原酸、木犀草素的含量测定

4.1 材料、仪器与试剂

4.2 方法与结果

4.3讨论

第五章 基于指纹图谱与PLS-DA评价雪菊质量

5.1 材料、仪器与试剂

5.2 溶液的制备

5.3 色谱条件的优化

5.4 方法学考察

5.5 指纹图谱的构建

5.6 共有色谱峰的紫外吸收光谱特征

5.7 相似度分析

5.8 偏最小二乘判别分析

5.9 讨论

结论与展望

参考文献

攻读学位期间发表的论文

致谢