去盆腔神经大鼠结肠传输功能变化及结肠黏膜TRPA1蛋白表达变化研究

摘要

目的：
　　产伤、手术或创伤造成的盆腔神经损伤是临床常见的结直肠动力紊乱原因，严重影响病人的生活质量，临床处理非常棘手。不管是动物实验还是临床上均观察到盆腔神经损伤后结肠传输功能呈现一定的自适应性恢复趋势，详细的调控机制不清。如果能够阐明这一适应性恢复的调控机制，就有望通过一定的干预措施加速和强化这一过程。本课题通过检测去盆腔神经模型动物结肠传输功能及其黏膜TRPA1表达变化，旨在探讨去盆腔神经支配后结肠传输功能的变化及其可能作用机制，为盆腔神经损伤后的肠动力紊乱及适应性恢复机制研究提供基础。
　　方法：
　　一、实验对象及分组
　　成年雄性Sprague-Dawley大鼠96只，6周龄，体质量(200±10)g，随机分为两部分:结肠传输功能检测部分42只，分为手术组与假手术组，各21只;TRPA1蛋白检测部分54只，分为对照组、假手术组及手术组，各18只。二、模型制备
　　1.手术组:取下腹正中切口，长约3cm，湿纱布隔离小肠于上腹部，解剖镜下辨认清楚膀胱、直肠、精囊腺、前列腺，用棉签在前列腺后下方钝性剥离出盆腔神经，显微剪剪断，缝合切口，关闭腹腔。
　　2.假手术组:假手术组模型制备仅需开腹后显露双侧盆腔神经，不切断，然后关腹，注意控制切口长度同手术组。
　　3.对照组:无任何处理。
　　4.行结肠传输功能检测部分大鼠在关腹前需行盲肠置管，操作如下:术中显露盲肠，在盲肠造口，置入一根硅胶管至近端结肠，用3-0丝线荷包缝合盲肠并固定，导管经左侧腹壁穿出，经皮下隧道引至颈后并固定于皮肤上。分别在术后第1、3、7天通过导管注入铬[51Cr]酸钠注射液0.2mL至近端结肠。给药3h后取出整段结肠平分为10段，同时收集3h内排出的粪便并标记为11段。测量每段的放射性通过伽玛计数器测定。计算51Cr分布的几何中心(geometric center，GC)，以GC值代表结肠传输功能。
　　三、检测指标
　　1.利用放射性同位素法(51Cr)测定术后第1天、第3天、第7天结肠传输功能。
　　2.利用Western Blotting检测术后第1天、第3天、第7天近端及远端结肠黏膜TRPA1的表达情况。
　　结果：
　　一、手术组与假手术组术后结肠传输功能变化
　　1.手术组术后第3天与第1天相比结肠传输功能明显恢复(p＜0.05)，术后第7天与第3天相比进一步恢复(p＜0.05)，提示手术组术后第7天结肠传输功能恢复。
　　2.假手术组术后第3天与第1天相比结肠传输功能显著恢复(p＜0.05)，术后第7天与第3天相比差异无显著性(p＞0.05)，提示假手术组术后第3天结肠传输功能恢复。
　　3.术后第1天手术组较假手术组51Cr分布的几何中心明显降低(p＜0.05)，表明手术组结肠传输延迟更为明显。术后第3天，手术组51Cr分布的几何中心仍显著低于假手术组(p＜0.05)。而术后第7天与假手术组相比，手术组51Cr分布的几何中心差异无统计学意义，提示手术组结肠传输功能术后第7天基本恢复正常，且随时间延长呈现逐渐增高的趋势。二、近端结肠黏膜TRPA1蛋白表达变化
　　1.对照组、假手术组和手术组近端结肠黏膜中TRPA1相对表达量比较，术后第1天，差异有统计学意义（F值=73.497，p＜0.05），进一步与对照组比较，假手术组及手术组表达均显著下调(p＜0.05)，手术组较假手术组下调更显著(p＜0.05);术后第3天，三组间差异无统计学意义（F值=2.087，p＞0.05）。术后第7天，三组间差异亦无统计学意义（F值=0.656，p＞0.05）。
　　2.假手术组及手术组术后第1天、第3天、第7天间比较，差异均有统计学意义（F值=5.651、41.005，p＜0.05），进一步两两比较提示在术后第3天都明显上调(p＜0.05)，第7天与第3天相比则差异均无统计学意义(p＞0.05)。
　　三、远端结肠黏膜TRPA1蛋白表达变化
　　1.对照组、假手术组和手术组远端结肠黏膜中TRPA1相对表达量比较，术后第1天，差异有统计学意义（F值=58.773，p＜0.05），进一步与对照组比较，假手术组及手术组表达均显著下调(p＜0.05)，手术组较假手术组下调更显著(p＜0.05);术后第3天，三组间差异有统计学意义（F值=8.680，p＜0.05），进一步两两比较，假手术组与对照组差异无统计学意义(p＞0.05)，手术组与对照组差异显著(p＜0.05)，与假手术组比较，手术组下调显著(p＜0.05);术后第7天，三组间差异亦无统计学意义(F值=1.319，p＞0.05)。
　　2.假手术组术后第1天、第3天、第7天间比较，差异有统计学意义(F值=16.975，p＜0.05)，进一步比较提示在术后第3天上调(p＜0.05)，第7天与第3天相比差异无统计学意义(p＞0.05)。
　　3.手术组术后第1天、第3天、第7天间比较，差异有统计学意义(F值=50.417，p＜0.05)，进一步比较提示TRPA1相对表达量在术后第3天上调(p＜0.05)，第7天与第3天相比继续上调，差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　结论：
　　1.去盆腔神经后大鼠结肠传输功能明显减弱，并随时间延长呈一明显的恢复趋势。
　　2.去盆腔神经后大鼠远端结肠黏膜TRPA1蛋白表达明显减弱，并随时间延长呈一明显的恢复趋势。
　　3.去盆腔神经后大鼠结肠传输功能与远端结肠黏膜TRPA1蛋白表达恢复趋势高度一致。
　　通过本课题研究，我们发现去盆腔神经后，大鼠远端结肠黏膜TRPA1蛋白表达明显减弱，并随时间延长呈一明显的恢复趋势，此趋势与去盆腔神经大鼠结肠传输功能恢复趋势高度一致。据此，我们认为盆腔神经损伤后结肠动力的适应性恢复与远端结肠黏膜TRPA1蛋白的表达变化有关。

目录

声明

缩略语表

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

全文总结

参考文献

文献综述 TRPA1蛋白在胃肠道中相关研究进展

参考文献

攻读硕士期间发表的论文

致谢