膀胱ICC钙激活钾/氯通道在糖尿病膀胱功能障碍发生中的表达研究

摘要

背景及目的：
　　糖尿病是一种慢性的、系统的代谢性疾病，并且该疾病已经成为一个全球性的健康问题，其在我国的总体发病率高达11.6％，在美国，它也影响了美国人口的8.3％。糖尿病膀胱功能障碍(DBD)是糖尿病泌尿并发症之一，它影响超过50％的糖尿病患者。早期发病隐匿，糖尿病患者和临床医生常常不重视，直到DBD疾病进展到后期，因为患者逼尿肌收缩减弱至消失，患者出现过度活动的膀胱(OAB)，尿潴留、尿急，排尿障碍以及排尿感觉的下降，其严重影响生活质量。
　　目前对DBD中膀胱兴奋性的降低研究主要集中在神经系统的调控上，临床上治疗DBD也多使用神经制剂，但多数患者疗效不甚满意。国内外相关研究已经证实膀胱肌源性兴奋性异常是逼尿肌兴奋性变化的重要环节之一，其中膀胱ICC细胞是肌源性兴奋性的调控中枢，更进一步的研究发现KCa/ClCa离子通道是影响ICC兴奋性的关键环节。本研究以与膀胱兴奋性和收缩耦联密切相关的膀胱ICC以及ICC细胞的KCa/ClCa离子通道为新的切入点，探讨DBD发病机理中神经损害以外的机制，结果将有助于进一步阐明DBD的发生机理，并为临床治疗提供新的可能靶点。
　　方法：
　　本研究以SD大鼠为研究对象，经STZ诱导构建糖尿病膀胱功能障碍模型。首先，ICC细胞特异性表达C-Kit蛋白，因此本实验通过通过酶消化法获得ICCs，利用PE-C-Kit抗体流式检测上述方法培养的ICCs纯度。再通过免疫荧光和RT-PCR技术对比检测正常及DBD膀胱ICC细胞中各KCa/ClCa通道亚型(BKCa、SKCa2、SKCa3、ClCa)的表达情况。最后，采用RT-PCR和免疫荧光双标检测不同葡萄糖浓度对正常膀胱ICC细胞的KCa/ClCa通道各亚型表达。
　　结果：
　　1.通过酶消化法获得的细胞纯度在96％，纯度较高，可以满足后续实验的需要。
　　2.与正常组相比，糖尿病ICCs中BKCa、SKCa2、SKCa3的mRNA表达量和蛋白表达量均明显升高，而ClCa表达量明显降低。
　　3.随着葡萄糖浓度的提高，BKCa、SKCa2、SKCa3的mRNA表达量和蛋白表达量呈现逐渐增加的趋势，ClCa的表达量则呈现不断降低的趋势。
　　结论：
　　1.根据ICC样细胞和逼尿肌细胞贴壁能力的不同，我们获得了高纯度的膀胱ICC样细胞。
　　2.利用Q-PCR技术和免疫荧光技术，检测出糖尿病组ICCs中BKCa、SKCa2、SKCa3的mRNA表达量和蛋白表达量较正常组明显增高，而ClCa的表达量较正常组降低，表明糖尿病组ICC细胞兴奋性降低。
　　3.利用Q-PCR技术和免疫荧光技术，证明高糖是导致膀胱ICC细胞BKCa、SKCa2、SKCa3、ClCa离子通道变化的重要因素，进一步说明膀胱ICC细胞中BKCa、SKCa2、SKCa2、ClCa在糖尿病导致DBD发病中可能发挥重要角色。

目录

声明

缩略词表

摘要

第一章 前言

1．1 膀胱逼尿肌具有肌源性兴奋性，膀胱ICC细胞是可产生自发电活动

1．2 钙激活钾／氯通道是影响膀胱ICC兴奋性的重要环节

1．3 本研究的主要内容

第二章 DBD大鼠和正常大鼠膀胱ICC细胞培养和鉴定

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 实验结果

2．4 实验讨论

第三章 Q-PCR和免疫荧光实验检测DBD大鼠和正常大鼠膀胱ICC细胞中BKCa、SKCa2、SKCa3、ClCa的表达

3．1 实验材料

3．2 实验方法

3．3 实验结果

3．4 实验讨论

第四章 不同浓度糖培养基对BKCa、SKCa2、SKCa3、ClCa的mRNA表达和蛋白表达影响研究

4．1 实验材料

4．2 实验方法

4．3 实验结果

4．4 实验讨论

全文结论

参考文献

文献综述 膀胱ICC细胞研究状况和展望

在读硕士期间发表的论文

致谢