促性腺激素释放激素激动剂对调节性T细胞的影响

摘要

胚胎种植是生殖过程最关键的步骤。低种植率是生殖医学领域始终未能解决的难题之一，也限制了辅助生殖技术的发展。现有的数据显示，2/3的胚胎种植失败与子宫内膜容受性相关。然而，目前临床上改善子宫内膜容受性的措施非常有限。子宫内膜容受性受多重因素影响。母胎界面的免疫微环境是影响子宫内膜容受性的重要因素之一，其功能状态也影响胚胎种植率。研究激素对免疫细胞的影响，可能揭示激素免疫功能与胚胎种植的关系。促性腺激素释放激素（GnRH）是生殖过程中的重要激素，具有多种免疫调节功能，其激动剂（GnRHa）应用于体外受精（IVF）30余年，是辅助生殖临床最常用的药物之一。调节性T细胞（Tregs）具有免疫抑制功能，且随月经周期及妊娠过程呈现动态变化，是胚胎种植能否成功以及能否持续妊娠重要的免疫因素。然而，GnRHa对子宫内膜免疫状态的影响尚不明晰。GnRHa作用后是否会对 Tregs产生影响，目前尚未发现明确报道。
　　本研究拟通过观察GnRHa作用后Tregs质与量的变化，评估子宫内膜免疫耐受状态，推测GnRHa免疫功能与胚胎种植的关系，为优化与改进IVF治疗方案提供依据。该课题分以下两个部分进行研究。
　　一、GnRHa对不孕症患者Tregs的影响
　　收集不孕症患者外周血及分泌期子宫内膜，根据是否接受 GnRHa处理分组，其中外周血部分分为 GnRHa组及非 GnRHa组，内膜部分女性因素不孕者分为 GnRHa组、非 GnRHa组，因绝对男性因素致女性不孕者为对照组。采用流式细胞技术检测外周血CD3+T淋巴细胞及CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞亚群和CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例，实时荧光定量PCR技术检测内膜Foxp3 mRNA和CTLA-4 mRNA水平，免疫组化检测内膜 Foxp3阳性细胞表达。结果显示，不孕症患者接受 GnRHa处理后外周血单个核细胞 CD3+/lymphocyte、 CD3+CD4+/CD3+、 CD3+CD8+/CD3+和CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比例及子宫内膜 Foxp3阳性细胞表达率无明显变化。GnRHa组子宫内膜Foxp3 mRAN和CTLA-4 mRNA水平较非GnRHa组有升高趋势，较对照组无明显变化，且非 GnRHa组 Foxp3 mRNA和CTLA-4 mRNA水平明显低于对照组。由此认为，使用GnRHa不改变不孕症患者外周血Tregs比例，但可增加子宫内膜Foxp3 mRNA和CTLA-4 mRNA水平。
　　二、GnRHa对成熟小鼠Tregs的影响
　　选择动情周期正常的成年昆明雌鼠为实验动物模型，分为实验组（GnRHa/COH组）及对照组（NS/COH），分别在GnRHa降调节第9天及COH后种植窗期，采用流式细胞技术检测外周血、脾脏、腹主动脉旁淋巴结、腹股沟区淋巴结CD3+T淋巴细胞及CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞亚群和CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例；实时荧光定量PCR检测子宫内膜 Foxp3 mRNA水平；ELISA检测血清 TGFβ1浓度。结果显示， GnRHa降调节后外周血、脾脏、腹主动脉旁淋巴结、腹股沟区淋巴结CD3+/lymphocyte、CD3+CD4+/CD3+、CD3+CD8+/CD3+和 CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比例及血清 TGF-β1浓度无明显变化，但子宫内膜Foxp3 mRNA水平明显提高；GnRHa降调节后 COH，其种植窗期外周血、脾脏 CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比例明显升高，腹主动脉旁淋巴结、腹股沟区淋巴结CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比例无显著变化，子宫内膜Foxp3 mRNA水平则明显提高，血清TGF-β1浓度无明显变化。由此认为，GnRHa降调节不改变外周血、脾脏、腹主动脉旁淋巴结、腹股沟区淋巴结Tregs比例及血清TGF-β1浓度，但可增加子宫内膜Foxp3 mRNA水平；GnRHa降调节后COH可使外周血、脾脏Tregs比例升高，并增加子宫内膜Foxp3 mRNA水平，不改变TGF-β1浓度。
　　综合两部分研究得出以下结论：使用GnRHa不改变外周血及次级淋巴器官Tregs数量，但可增加子宫内膜Foxp3 mRNA和CTLA-4 mRNA水平；使用GnRHa降调节后促排卵，可以提高种植窗期外周血及脾脏 Tregs数量，并且增加子宫内膜 Foxp3 mRNA水平；推测GnRHa可以提高母体子宫内膜局部的免疫耐受状态，并改变COH后母体系统及子宫局部免疫耐受状态，为胚胎种植提供有利条件。使用 GnRHa不改变血清TGFβ1浓度，推测GnRHa对Tregs的影响可能改变Tregs分泌TGFβ1。

目录

封面

声明

目录

英文缩写词表

英文摘要

中文摘要

第一章 前言

1.1 选题缘由

1.2 研究背景

1.3 研究意义

1.4 研究内容

1.5 研究方法

第二章 促性腺激素释放激素激动剂对不孕症患者调节性T细胞的影响

2.1材料与方法

2.2 结果

2.3 讨论

2.4 结论

第三章 促性腺激素释放激素激动剂对成年雌鼠调节性T细胞的影响

3.1 材料与方法

3.2 结果

3.3 讨论

3.4 结论

全文总结

本研究尚需进一步完善的方面

参考文献

文献综述: 调节性T细胞研究进展

硕士期间发表论文的情况

致谢