Tempol对大鼠背部超长任意皮瓣存活影响的实验研究

摘要

实验目的:
　　研究新型小分子氧自由清除剂Tempol对大鼠背部超长任意皮瓣存活的影响，并从抗氧化应激、促进血管生成，减轻炎症反应三个方面探讨其作用机制，为阐明缺血再灌注损伤造成皮瓣远端发生坏死的发生机制提供了理论依据，为如何减轻缺血再灌注损伤造成皮瓣远端出现严重坏死，提高任意皮瓣应用效率，覆盖关键创面提供新思路。
　　实验方法:
　　1.随机将84只雄性成年SD大鼠分为生理盐水对照组和Tempol组，42只/组，所有皮瓣均参考Mcfarlane皮瓣进行切取，于大鼠背部制备面积为9cm*3cm大小的LRPSF。Tempol组术前15min至术后第7天，每天按(100mg/Kg)腹腔注射Tempol（1∶10生理盐水稀释后），生理盐水对照组:按相同的方法注射等量的生理盐水。皮瓣移植后及时观察、记录每组实验动物成活及皮瓣存活情况;第7天，测量各组大鼠皮瓣成活率，（1g/ml）明胶氧化铅灌注后行MicroCT血管三维成像观察血管生成情况并利用3D-viewer及MAT-LAB软件计算血管长度和血管容积。
　　2.术后第7天剪取皮瓣中段组织行HE染色观察皮瓣组织层次结构、血管生成、炎症反应及组织坏死程度，同时行免疫组织化学染色观察VEGF表达情况。
　　3.术后即刻及第1，3，7天，将皮瓣中段组织匀浆，采用水溶性四氮唑-1法及可见光法分别测定抗氧化酶SOD和脂质过氧化产物MDA含量;利用ELISA相关试剂盒检测皮瓣组织中炎性因子TNF-α和IL-6含量。
　　实验结果：
　　1.所有实验动物均成活至实验完成，各组皮瓣均无感染、皮瓣下血肿皮及瓣下积液。随时间延长，两组皮瓣远端均发生不同程度的坏死，但Tempol组皮瓣坏死程度较生理盐水对照组轻;且Tempol组血管分布及连续性均优于生理盐水对照组。术后第7天Tempol组皮瓣成活率、血管容积及血管总长度均显著高于生理盐水对照组(p＜0.05或p＜0.01)。
　　2.术后第7天组织学及免疫组织化学染色观察示，与生理盐水对照组比较，Tempol组皮瓣各层组织结构清楚，微小血管生成明显增多，组织炎症反应及炎性细胞浸润较轻，真皮组织内VEGF蛋白染色程度明显增高。
　　3.测量两组皮瓣组织匀浆后发现，术后1，3，7天两组皮瓣组织SOD、MDA、TNF-α、IL-6差别具有统计学意义，Tempol组MDA、TNF-α、IL-6含量明显低于生理盐水对照组，SOD含量明显高于生理盐水对照组(P＜0.05);而术后即刻两组皮瓣组织匀浆各项检测指标差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　实验结论:
　　1.Tempol能够显著提高任意皮瓣成活率，减轻皮瓣组织水肿及炎症反应，促进皮瓣存活;2.Tempol能够增加皮瓣组织中VEGF的表达，促进血管生成，从而提高皮瓣成活率;3.Tempol能够显著提高皮瓣组织中SOD含量，降低MDA、TNF-α及IL-6含量，清除氧自由基及抑制炎症因子释放，减轻皮瓣缺血再灌注损伤，从而提高皮瓣成活率。

目录

声明

缩略语表

摘要

第一章 前言

第二章 Tempol对大鼠背部超长任意皮瓣存活初步机制研究

2．1 材料与方法

2．1．1 实验对象

2．1．2 实验仪器

2．1．3 实验试剂

2．1．4 实验主要试剂的配制

2．1．5 实验方法

2．1．6 观测指标及方法

2．2 结果

2．2．1 大体观察

2．2．2 皮瓣成活率测量

2．2．3 Micro CT血管成像观察

2．2．4 组织学观察

2．2．5 VEGF免疫组织化学染色

2．2．6 两组皮瓣组织中SOD、MDA测定

2．2．7 两组皮瓣组织中TNF-α、IL-6测定

2．3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 防治皮瓣缺血再灌注损伤的研究进展

硕士期间发表论文的情况

致谢