银杏叶提取物对丙烯酰胺中枢神经毒性的保护作用及机制探讨

摘要

目的：丙烯酰胺（ACR）是一种中等毒性的化学物质，人们在日常生活中接触广泛。进入人体内的ACR不仅会损伤外周神经，且对中枢神经系统有影响。银杏叶提取物（EGb）是中国传统药物，其药用价值高，对心脑血管系统有明显的保护作用。大量研究表明EGb通过抗氧化作用来起到神经保护作用的。然而，EGb是否能够缓解或抑制 ACR造成的神经损伤尚未有深入研究。本研究银杏叶提取物EGb对丙烯酰胺中枢神经毒性的保护作用及其相关机制探讨。
　　方法：将40只鼠龄为6周的雄性昆明小鼠随机分为五组：空白对照组、实验对照组（ACR）、(ACR+EGb30mg/kg)组、(ACR+EGb60 mg/kg)组和(ACR+EGb120mg/kg)组，每组8只。空白对照组不施加任何处理；实验对照组早上灌胃生理盐水，下午灌胃20mg/kg的ACR；30mg/kg组早上灌胃30mg/kg EGb，下午灌胃20mg/kg ACR；60mg/kg组早上灌胃60mg/kg EGb，下午灌胃20mg/kg ACR；120mg/kg组早上灌胃120mg/kg EGb，下午灌胃20mg/kg ACR；连续灌胃四周。取材前1天对小鼠后肢支撑力观察；取材前3天分别对小鼠后肢距离进行测量统计，对小鼠进行步态评分，同时进行旷场实验，记录5min内小鼠水平移动格子数和站立次数；通过免疫组织化学法检测小鼠海马组织中DCX及GAP-43的表达；用Western blot检测小鼠海马内DCX，BDNF及GAP-43的表达。
　　结果：
　　1、实验各组小鼠后肢支撑力的变化：实验对照组小鼠ACR染毒后后肢支撑力基本缺失，无法站立。 EGb30mg/kg组，EGb60mg/kg组，EGb120mg/kg组小鼠后肢支撑与实验对照组相比明显增强，能短时间站立。
　　2、实验各组小鼠后肢距离：实验对照组小鼠ACR染毒后后肢间距增大，呈“一”字脚， EGb30mg/kg组，EGb60mg/kg组，EGb120mg/kg组小鼠后肢间距与实验对照组比较均明显变小，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　3、旷场实验：实验对照组小鼠ACR染毒小鼠在5min内经过的格子数比空白对照组明显减少（P＜0.01）；EGb30mg/kg组和EGb60mg/kg组小鼠经过的格子数与染毒小鼠比较明显增加（P＜0.05）。染毒小鼠在5min内站立次数比空白对照组比较明显减少（P＜0.01）；EGb60mg/kg组小鼠站立次数与实验对照组比较明显增加（P＜0.05）；而EGb30mg/kg、EGb120mg/kg组小鼠站立次数与实验对照组相比无统计学意义（P＜0.05）。
　　4、免疫组织化学结果：实验对照组小鼠ACR染毒后海马区DCX和GAP-43的表达较空白对照组少（P＜0.05）；EGb30mg/kg组、EGb60mg/kg和EGb120mg/kg组小鼠海马区DCX和GAP-43的表达与染毒小鼠比较明显增加（P＜0.05）。
　　5、免疫印迹结果：实验对照组小鼠ACR染毒后海马区DCX，BDNF和GAP-43的表达较空白对照组少（P＜0.05）；EGb60mg/kg和EGb120mg/kg组小鼠海马区DCX和GAP-43的表达与实验对照组小鼠比较明显增加（P＜0.05）。EGb30mg/kg，EGb60mg/kg和EGb120mg/kg组小鼠海马区BDNF的表达与实验对照组小鼠比较明显增加（P＜0.05）.
　　结论：
　　1、EGb能够改善ACR的神经毒性，提高小鼠的运动能力。
　　2、EGb可通过上调ACR染毒小鼠海马区DCX，BDNF和GAP-43蛋白的表达修复ACR对海马区的损伤。
　　3、本实验结果为EGb用于预防或治疗ACR的神经毒性提供了一定的实验依据。

目录

声明

序言

实验技术路线

实验材料

1 主要仪器与耗材

2 试剂

3 实验动物

实验方法

1 常用试剂的配置

2 实验动物模型制备与给药

3 后肢支撑力观察：

4 步态分析：

5 旷场实验：

6 动物取材：

7 组织脱水及石蜡包埋：

8 制作脑组织切片：

9 苏木素-伊红染色（HE染色）

10 免疫组织化学检测（HRP法）：

11 Western Blot检测

12 统计学分析

结果

1 实验各组小鼠后肢支撑力的变化

2 实验各组小鼠后肢距离差异

3 实验各组小鼠步态评分

4 旷场实验

5 各组小鼠海马区HE染色结果

6 免疫组织化学检测结果

7 Western Blot检测结果

讨论

总结与展望

参考文献

综述:银杏内酯A对中枢神经系统作用及机制的研究进展

中英文缩写语对照表

攻读硕士期间发表的文章

致谢