浊点萃取技术在双嘧达莫制剂中的药代动力学应用研究及相关离子检查

摘要

本论文通过大量的文献调研发现浊点萃取技术（Cloud point extraction，CPE）应用广泛，具有简单、成本低廉、低毒、表面活性剂易处理等优点，但是浊点萃取运用于双嘧达莫制剂的研究还未有报道。本论文首次运用浊点萃取技术，以双嘧达莫片和银杏达莫注射液为研究对象，对大鼠给药后体内双嘧达莫的药动学行为进行研究，同时对银杏达莫注射液中痕量金属铅和钾离子进行定量检查，获得满意结果。
　　1.双嘧达莫片临床应用较广泛，经文献检索未发现浊点萃取应用于生物样品中双嘧达莫萃取的报道。我们建立了浊点萃取-HPLC对大鼠灌胃双嘧达莫片后血药浓度的测定和药动学研究的方法。实验选择Triton X-114作为萃取介质，对浊点萃取过程中相关参数进行优化，CPE优化条件为：5％(w/v) Triton X-114，1.5mol·L-1 NaOH，50℃水浴加热20min；色谱条件为：色谱柱为Zorbax SB-C18(250×4.6mm,5μm)，流动相为乙腈-0.02M醋酸铵缓冲液（冰醋酸调pH至5.6）（60︰40），柱温30℃，检测波长292nm,流速0.8mL·min-1，该方法在0.1-20.0μg·mL-1范围内线性良好，在低、中、高（0.2、2.0、16.0μg·mL-1）三个浓度的日内RSD不大于5.4%，日间RSD不大于12.6%，准确度RE在±9.7%范围内，三个浓度下双嘧达莫提取回收率不低于83.1%。该方法简单、准确、快速、环保，成功运用于大鼠灌胃双嘧达莫片后的药代动力学的应用研究。
　　2.银杏达莫注射液为双嘧达莫的复方制剂，文献检索未见关于银杏达莫注射液中双嘧达莫测定的药动学研究报道，也未见基于浊点萃取在银杏达莫注射液中应用的研究报道。我们建立了浊点萃取结合HPLC-ESI-MS/MS对大鼠尾静脉注射银杏达莫注射液后血药浓度的测定和药动学研究的方法。影响浊点萃取的相关参数（Triton X-114和NaOH的浓度、平衡温度等）被优化，CPE条件为：0.2mol·L-1 NaOH，7%（w/v） Triton X-114，55℃水浴20min；色谱条件为：色谱柱为SunFire C18柱（150mm×2.1mm,5μm），0.1%甲酸-乙腈梯度洗脱，柱温40℃，流速0.2mL·min-1；质谱条件：采用电喷雾离子化(ESI)模式，多反应监测(MRM)的扫描方式，正离子检测，检测对象为m/z505.3（双嘧达莫的[M+H]+）和m/z285.1（内标地西泮的[M+H]+）。该方法在10.0-2500.0ng·mL-1浓度范围内线性良好，低、中、高（20.0、1000.0、2000.0ng·mL-1）三个浓度的日内RSD不大于1.8%，日间RSD不大于7.2%，准确度RE在±3.6%范围内。本研究成功验证了浊点萃取结合液质联用方法的可操作性及实用性。
　　3.铅为有害元素，被人体吸收后会在体内引起蓄积性毒性反应，对注射液中金属铅的测定具有重要意义。我们建立了浊点萃取-石墨炉原子吸收光谱法测定银杏达莫注射液中痕量铅的方法。实验选择双硫腙作为络合剂，Triton X-114作为萃取介质，萃取富集注射液样品中痕量铅。用1%NH4PO4作为基体改进剂测定铅。CPE条件为：1×10-3mol·L-1双硫腙溶液0.4mL，20g·L-1的Triton X-114溶液0.7mL，pH6.0缓冲溶液1mL，50℃水浴平衡15min；测定条件：波长283.3nm，灯电流10mA，光谱通带宽度1.0nm。在优化条件下，所得工作曲线回归方程为A=0.0249C+0.0046（r=0.9996），方法检出限为0.0875ng·mL-1，富集倍率为10，线性范围为0.1-30.0ng·mL-1，加标回收率在99.4%～104.4%之内。该方法用于银杏达莫注射液中痕量铅的测定，取得满意的实验结果。
　　4.钾离子检查是静脉注射剂有关物质检查中一项重要指标。本论文采用火焰原子光谱法测定银杏达莫注射液中钾离子的含量。测定条件：波长766.5nm，工作电流6mA，狭缝0.5nm，燃气流量1.8L·min-1。0.2-1.6μg·mL-1浓度范围内线性关系良好，r=0.9996，钾离子平均回收率为101.8%，RSD为2.3%。本实验方法操作简单快速，检测结果准确可靠，为银杏达莫注射液的质量控制提供一定的参考方法。

目录

声明

第一章 绪论

1.1本课题的研究背景、意义和研究内容

1.2双嘧达莫片的研究现状与临床使用

1.3银杏达莫注射液研究现状和临床应用

1.4常用的样品前处理方法

第二章 浊点萃取-HPLC对大鼠灌胃双嘧达莫片后血药浓度的测定和药动学研究

2.1引言

2.2实验材料

2.3试验方法

2.4分析方法的建立与确证

2.5大鼠灌胃双嘧达莫片后血浆中双嘧达莫的药动学研究

2.6讨论

2.7结论

第三章 浊点萃取结合HPLC-ESI-MS/MS对大鼠尾静脉注射银杏达莫注射液后血药浓度的测定和药动学研究

3.1引言

3.2实验材料

3.3试验方法

3.4分析方法的建立与确证

3.5大鼠尾静脉注射银杏达莫注射液后血浆中双嘧达莫的药动学研究

3.6讨论

3.7结论

第四章 浊点萃取-GFAAS法测定银杏达莫注射液中痕量铅

4.1引言

4.2仪器与试剂

4.3仪器工作条件

4.4 CPE方法

4.5标准曲线和线性范围

4.6回收率试验

4.7银杏达莫注射液样品测定

4.8结果与讨论

4.9结论

第五章 FAAS法测定银杏达莫注射液中钾的含量

5.1引言

5.2仪器与试药

5.3试验方法与结果

5.4分析方法的建立和确证

5.5样品测定

5.6讨论

第六章 总结与展望

6.1总结

6.2展望

参考文献

硕士期间发表文章

致谢