灵芝孢子不同有效部位提取及体内抗肿瘤作用研究

摘要

灵芝孢子（Ganoderma lucidium spore）是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极其细小的孢子，为灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物质。现代药理研究表明，灵芝孢子具有抗肿瘤、增强免疫调节、抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗缺氧能力、清除自由基等作用。灵芝及灵芝孢子化学成分复杂，具有广泛的生物学活性，其中多糖和三萜两大类活性物质被认为是主要功效成分。
　　灵芝孢子油是灵芝孢子经破壁、超临界二氧化碳萃取所得脂溶性活性物质，现代研究表明具有抗肿瘤、保肝护肝、增强免疫力等功效。前期研究认为灵芝孢子油具有增强免疫力及抗肿瘤作用是由于其含丰富的灵芝三萜类化合物。随着近年对灵芝孢子油成分研究的深入，越来越多研究认为灵芝孢子主要以甘油三酯类化合物存在，还有少量游离脂肪酸、类固醇酯、脂溶性维生素，仅含极微量的三萜类成分。
　　通过不同的工艺提取灵芝孢子的不同有效部位，包括以灵芝多糖为主的灵芝孢子水提物、以灵芝三萜与甾醇为主的灵芝孢子醇提物、超临界二氧化碳萃取所得脂质有效部位灵芝孢子油。使用紫外-可见分光光度法和HPLC法测定不同有效部位的功效成分；并通过肝癌H22细胞株接种裸鼠腋下试验，考察灵芝孢子不同有效部位的抗肿瘤作用。为灵芝孢子不同有效部位进一步开发有临床价值的药物提供技术支持。
　　研究内容如下：
　　1.灵芝孢子不同有效部位提取工艺研究
　　（1）水提物单因素试验
　　（2）醇提物单因素试验
　　（3）脂溶性有效部位（灵芝孢子油）超临界CO2萃取单因素试验及正交试验研究
　　2.灵芝孢子不同有效部位功效成分测定
　　（1）紫外-可见分光光度法测定三萜及甾醇含量
　　（2）紫外-可见分光光度法测定多糖含量
　　（3）HPLC法测定甘油三酯类成分含量及方法学考察
　　3.灵芝孢子不同部位体内抗肿瘤作用研究
　　通过肝癌H22细胞株接种裸鼠腋下试验，考察灵芝孢子水提物、灵芝孢子醇提物、灵芝孢子脂质部位（灵芝孢子油）等不同有效部位的抗肿瘤作用
　　研究结果如下：
　　1.采用加热回流提取法，灵芝孢子粉水提物最佳工艺为料液比1:30，提取时间为2h，提取次数1次，温度100℃。
　　2.采用超声波提取法，灵芝孢子粉醇提物最佳工艺为料液比1:30，提取时间为2h，提取次数1次，提取温度60℃。
　　3.灵芝孢子油超临界CO2萃取最佳工艺为萃取压力25MPa，萃取温度40℃；分离釜I压力为10MPa，温度45℃。三次萃取工艺验证结果为出油量约48g，收油率24％。萃取工艺稳定可行，重复性较好。
　　4.灵芝孢子醇提物以三萜与甾类成分为主，含量达26.8%，灵芝多糖含量3.24%。灵芝孢子水提物以多糖为主，含量达16.96%，三萜与甾醇含量1.05%。灵芝孢子油以甘油三酯为主，含量达74.25%，三萜与甾类成分含量为35.51%。
　　5.灵芝孢子油（口服）组、灵芝孢子油（注射）组能明显抑制裸鼠H22肝癌的生长作用（与对照组比较，P＜0.05或P＜0.01），抑制率分别为30.78%、48.14%；灵芝孢子水提物、灵芝孢子醇提物也有一定的抑制作用，但与对照组比较无明显统计学差异（P＞0.05），抑制率分别为17.76%、26.29%；以灵芝孢子油口服和注射肿瘤抑制效果最佳。

目录

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中英文缩写对照词表

第一章 序言

1.1 研究背景

1.2 研究目的和意义

1.3 研究内容

1.4 研究路线

第二章.灵芝孢子不同有效部位提取工艺研究

2.1 前言

2.2 实验材料与仪器

2.3 方法与结果

2.4 实验小结

第三章 灵芝孢子不同有效部位的功效成分测定

3.1 前言

3.2 实验试剂及仪器

3.3 方法与结果

3.4实验小结

第四章 灵芝孢子不同部位体内抗肿瘤作用研究

4.1 前言

4.2 实验材料

4.3实验方法

4.4 结果与讨论

4.5 实验小结

第五章 总结与展望

5.1.全文总结

5.2.创新点

5.3.研究展望

参考文献

攻读学位期间发表的论文

致谢