矽肺患者自身免疫相关指标水平及与临床病情关系的研究

摘要

背景及目的：尘肺是我国头号职业病，是指在职业活动中长期吸入生产性矿物性粉尘并在肺内潴留而引起的以肺组织弥漫性纤维化为主的疾病。其中，又以矽肺对工人健康危害最为严重，其病例数占尘肺总病例逾半。因矽肺患者人数众多，对工人健康危害大，矽肺的发病机制一直是国内外职业卫生研究人员关注的重点。研究发现，吸入体内的粉尘颗粒可以激活自身免疫细胞从而介导包括自身免疫病在内的许多免疫异常。本研究通过分析矽肺患者血清中与自身免疫情况相关的类风湿因子（RF）、抗双链 DNA抗体（抗ds-DNA抗体）、叉头状转录因子3（Foxp3）、维甲酸相关孤核受体γt（RORγt）、CD4+CD25+调节性T淋巴细胞（CD4+CD25+regulatory T cells，Tregs）、辅助性T细胞17（T help cell17, Th17）、白介素17（IL-17）等免疫指标的表达水平和抗核抗体(ANA)的异常率，及其与矽肺患者肺部病变程度的相关性。初步探讨矽肺患者免疫状况及其与矽肺患者自身肺部病变程度的相关性。尝试找出能协助反映矽肺患者肺部实际病变情况的客观指标，为辅佐临床诊断、病情判断、改善治疗方案及疗效判断等提供理论参考依据。
　　方法：
　　1.研究对象
　　分别以120例矽肺患者为矽肺组，90例无职业危害因素接触的医务工作者及办公室文职人员为健康对照组，收集两组人员的年龄、性别、吸烟习惯、既往疾病史等一般情况。收集矽肺组的工种、工龄、矽肺诊断期别、总体密集度。
　　2.实验方法
　　2.1 血样标本收集收集矽肺组患者入院后第2天晨起空腹全血5ml/10ml，收集健康对照组晨起空腹全血5ml/10ml，经离心后留取血清备检。
　　2.2 采用免疫比浊法检测类风湿因子表达水平、酶联免疫吸附法检测抗ds-DNA抗体、间接免疫荧光法检测ANA滴度、Real-time PCR法测定转录因子Foxp3及RORγt表达水平、流式细胞计量法测定Treg、Th17细胞表达水平、ELISA方法测定血清IL-17细胞因子水平。
　　2.3 矽肺组入院后第二日进行血气分析检测，收集血气分析指标二氧化碳分压（PCO2）、氧分压（PO2）检查结果。
　　2.4 矽肺组入院后第二日进行肺通气功能检测，收集相关检测指标结果。检测项目包括用力肺活量( FVC)、第1秒用力呼气容量(FEV1)、1秒率(FEV1％)、最高呼气流量(PEF)、最大呼气期流量(FEF25～75%)；用力呼气25%肺活量的瞬间流量( FEF25%)、用力呼气50%肺活量的瞬间流量( FEF50%)、用力呼气75%肺活量的瞬间流量( FEF75%)、第1秒用力呼气容量占肺活量百分比（FEV1/VC%）。
　　3.统计方法
　　采用SPSS19.0软件进行统计分析，所有计量资料均进行正态性检验（K-S检验），符合正态分布用xs形式描述，不符合正态分布的计量资料采用M（P25，P75）描述，两组之间比较采用两样本的t检验或两样本的秩和检验，多组之间比较采用方差分析或多样本比较的秩和检验；率比较采用χ2检验或Fisher's确切概率法；相关性分析采用Pearson相关分析或Spearman等级相关分析。
　　结果：
　　1、矽肺组ANA异常率高于健康对照组（P＜0.05），但在不同的矽尘接触时间、矽肺分期、总体密集度、肺通气功能及血气分析指标氧分压正常与否间的异常率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　2、矽肺组与健康对照组血清中的RF、抗ds-DNA抗体表达水平均在检测正常范围内，两组间的RF、ds-DNA抗体表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；不同矽肺分期、总体密集度之间RF、抗ds-DNA抗体表达水平无统计学差异（P＞0.05）；矽肺患者RF表达水平与年龄存在弱的正相关（rs为0.227，P＜0.05），与矽尘接触时间、肺通气功能实测值占预计值的百分比、血二氧化碳分压、血氧分压均不存在相关关系（P＞0.05）；抗ds-DNA抗体表达水平与年龄、矽尘接触时间、肺通气功能实测值占预计值的百分比、血二氧化碳分压、血氧分压均不存在相关关系（P＞0.05）。
　　3、矽肺组血清中的转录因子Foxp3及RORγt表达水平高于健康对照组（P＜0.05）；矽肺叁期患者血清转录因子Foxp3表达水平高于矽肺壹期、矽肺贰期患者（P＜0.05）；矽肺叁期患者血清转录因子RORγt高于矽肺壹期患者（P＜0.05）；矽肺壹期、贰期间Foxp3及RORγt表达水平比较无统计学差异（P＞0.05）；矽肺贰期与叁期患者间转录因子RORγt表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。不同总体密集度矽肺患者间Foxp3及RORγt表达水平比较无统计学差异（P＞0.05）；Foxp3及RORγt表达水平与矽肺患者年龄、矽尘接触时间、肺通气功能、血气分析均不存在相关关系（P＞0.05）。
　　4、矽肺组血清中的Treg、Th17细胞表达水平高于健康对照组（P＜0.05）；矽肺壹期与贰期+叁期两组间患者的血清Treg、Th17细胞表达水平比较，无统计学差异（P＞0.05）；矽肺患者Treg细胞表达水平与矽尘接触时间存在负相关（rs为-0.390，P＜0.05），与肺通气功能FVC、FEV1实测值占预计值的百分比存在正相关（rs分别为0.487、0.460，P＜0.05），与年龄、血氧分压、血二氧化碳分压、肺通气功能其他指标的实测值占预计值的百分比不存在相关关系（P＞0.05）；矽肺患者Th17细胞表达水平与年龄、矽尘接触时间、肺通气功能、血气分析均不存在相关关系（P＞0.05）。
　　5、矽肺组血清中的IL-17表达水平高于健康对照组（P＜0.05）；不同矽肺分期、总体密集度之间IL-17表达水平无统计学差异（P＞0.05）；IL-17表达水平与矽肺患者年龄、矽尘接触时间、肺通气功能、血气分析均不存在相关关系（P＞0.05）。
　　结论：
　　1、部分矽肺患者出现机体免疫紊乱，可出现自身免疫抗体；
　　2、矽肺患者ANA异常率高于正常人，但目前未发现其与矽肺肺部病变程度存在相关性；
　　3、矽肺患者RF值、抗ds-DNA抗体水平均在正常范围内，抗ds-DNA抗体水平有随矽肺分期增加而升高的趋势，但与正常人群比较无统计学差异；且目前未发现上述两者与矽肺肺部病变程度存在相关性。
　　4、矽肺患者Treg、Th17细胞及其关键转录因子Foxp3、RORγt和细胞因子IL-17的表达水平均高于正常人群，且Foxp3、RORγt和IL-17的表达水平表现出随矽肺分期增加而升高的趋势，说明Treg、Th17及其关键转录因子、细胞因子参与了矽肺患者的免疫紊乱，可能与矽肺严重程度存在关联。
　　5、目前研究发现，Treg细胞、转录因子Foxp3及RORγt与矽肺患者肺部病变程度存在一定相关性，可作为辅佐疗效判断的参考指标。

目录

声明

1 前言

1.1研究背景

1.2研究目的、意义

1.3研究内容

2 方法

2.1研究路线

2.2实验材料

2.3研究方法

3 结果

3.1矽肺患者与健康对照组的一般情况

3.2矽肺组与健康对照组ANA异常率比较

3.3矽肺组与健康对照组RF值比较

3.4矽肺组与健康对照组抗ds-DNA抗体水平比较

3.5不同矽肺期别间患者血气分析检查结果比较

3.6不同矽肺期别间患者肺通气功能检查结果的比较

3.7 ANA在不同的矽尘接触时间、矽肺期别等之间的异常率比较

3.8不同矽肺期别、总体密集度患者间RF值、抗ds-DNA抗体水平的比较

3.9矽肺患者血清RF值、抗ds-DNA抗体水平与病情的相关性分析

3.10矽肺组与健康对照组间转录因子Foxp3表达水平比较

3.11矽肺组与健康对照组间转录因子RORγt表达水平比较

3.12矽肺组与健康对照组间Treg、Th17表达水平比较

3.13矽肺组与健康对照间白介素17（IL-17）蛋白表达水平比较

3.14不同矽肺期别、总体密集度患者间转录因子Foxp3、RORγt表达水平比较

3.15矽肺患者血清转录因子Foxp3、RORγt表达水平与病情相关性的分析

3.16不同矽肺期别患者间Treg、Th17细胞的表达水平

3.17矽肺患者Treg、Th17细胞表达水平与病情相关性的分析

3.18不同矽肺期别、总体密集度患者间IL-17的表达水平比较

3.19矽肺患者血清IL-17表达水平与病情相关性的分析

4 讨论

5 结论

6 创新性与局限性

6.1本研究的创新性

6.2本研究的局限性

参考文献

综述：自身免疫指标的临床意义及与矽肺的关系

攻读硕士期间发表论文

致谢