绞肌蓝热处理产物抗NSCLCA549细胞有效成分研究

摘要

绞股蓝经高温、高压热处理得到的绞股蓝热处理产物与原药材相比，具有很强的抑制非小细胞肺癌(Non-smallcelllungcarcinoma，NSCLC)A549细胞的增殖活性。
　　 本研究目的：以绞股蓝热处理产物为研究对象，分离、鉴定其有效成分，并评价它们对A549细胞增殖的抑制作用。研究方法:分别通过100、110、120和130℃及加热1h、2h和3h，确立制备绞股蓝热处理产物的最佳条件;利用大孔树脂HP20吸附法，通过20％、50％及95％乙醇洗脱溶剂洗脱，筛选有效部位;采用硅胶柱色谱、凝胶色谱及反相C18色谱法，分离有效成分;通过NMR、Mass、UV等分析手段，鉴定有效成分的分子结构;运用MTT法检测绞股蓝热处理前后总提物及有效成分对A549细胞增殖的作用;利用UPLC-MS分析。
　　 方法：测定不同热处理条件下的绞股蓝热处理产物及原药材中有效成分的含量。
　　 研究结果：(1)绞股蓝热处理产物的最佳制备条件为130℃、0.24MPa热处理3h，其乙醇提取物与原药材乙醇提取物相比，具有更强的抑制A549细胞增殖作用，其IC50±SD值为198.13±7.60μg/mL，而原药材乙醇提取物为411.61±32.43μg/mL。(2)绞股蓝热处理产物在大孔树脂HP20的不同极性洗脱部位中，95％乙醇洗脱部位对A549细胞增殖具有较强的抑制作用。(3)从95％乙醇洗脱部位中分离、鉴定出4种达玛烷类皂苷，分别为达木林A(damulinA)、达木林B(damulinB)、绞股蓝皂苷LI(gypenosideLI)及绞股蓝皂苷L(gypenosideL)，其中达木林A与达木林B是绞股蓝热处理后新发现的化合物。(4)这四种化合物均具有较强的抑制A549细胞增殖作用，其IC50±SD值分别为26.98±0.51、4.56±0.58、50.96±9.55及34.94±4.23μg/mL，而阳性对照物人参皂苷Rg3(S)为39.26±2.05μg/mL。(5)四种达玛烷类皂苷在绞股蓝中的含量检测结果，在相同加热时间条件下，随着热处理温度的升高而增加;在同等温度条件下，随加热时间的增加而提高，最佳条件为130℃温度、0.24MPa压力、热处理3h，此时的绞股蓝热处理产物中含达木林A、达木林B、绞股蓝皂苷LI(gypenosideLI)及绞股蓝皂苷L(gypenosideL)分别为11902.19±0.18，5876.64±0.50，2462.52±0.21，6130.26±0.27μg/g。
　　 结论：热处理方法可以成为一种从天然物中获得更多活性成分的有效途径。

目录

摘要

中英文对照及英文缩写词表

图解目录

表目录

第一章 前言

第一节 肺癌的研究状况

第二节 绞股蓝研究动态

一、绞股蓝简介

二、绞股蓝的化学成分研究

三、绞股蓝的生物活性研究

第三节 皂苷类成分水解的研究进展

第四节 本研究背景和意义

第一章 实验部分

第一节 绞股蓝热处理产物的制备

第二节 绞股蓝热处理产物不同极性部位的分离

第三节 绞股蓝热处理产物有效成分的分离、鉴定

第四节 抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖活性检测

第五节 绞股蓝热处理产物中皂苷类有效成分的含量测定

第二章 实验结果与讨论

第一节 热处理前后绞股蓝对A549细胞增殖的抑制作用及成分转化

第二节 绞股蓝热处理产物有效部位的确定

第三节 绞股蓝热处理产物有效成分的结构鉴定

一、化合物1的结构鉴定

二、化合物2的结构鉴定

三、化合物3的结构鉴定

四、化合物4的结构鉴定

第四节 绞股蓝热处理产物有效成分对A549细胞增殖的抑制作用

第五节 绞股蓝热处理产物有效成分的含量测定

一、标准曲线、检测限(Limit of detection，LOD)和最低定量限(Limit of quantitation，LOQ)

二、准确度和重复性

三、精密度和稳定性

四、四种皂苷类成分在绞股蓝中的含量测定

第三章 结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文、发明专利及获奖目录

致谢

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