强血管生成促进剂SDY-08的促组织修复作用

摘要

背景与目的：血管生成(angiogenesis)是指从已存在的微血管床上芽生出新的以毛细血管为主的血管系统的过程。这一过程包括毛细血管内皮细胞的增殖和迁移。在正常生理状态下，人体血管内皮细胞的倍增时间约为1年。人体只有在较特殊的环境下才会出现血管生成，例如创伤愈合，胚胎发生和女性经期等。组织修复的关键环节之一为血管新生，血管新生好坏直接影响组织修复的速度，因此血管再生调控一直是组织修复研究关注的焦点之一。自从70年代初。美国哈佛医学院的Folkman J博士[27]最早预言了用促进血管生成即“治疗性血管生成”的方法治疗缺血性疾病的前景后，特别是近20年来，人们对血管生成因子，如血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)家族和血管生成素(Angiopoietins)家族及它们的受体家族和血管生成抑制物(如血小板因子4、Angiostatin、Endostatin及Vasostatin等)进行了广泛而深入的研究，提出了内源性血管生成因子与血管生成抑制因子间的“平衡与失衡”理论。在众多血管生成因子中VEGF是最受关注的，它在组织修复过程中具有广泛的调节作用。通过药物的干预或促进VEGF的表达与释放从而达到治疗目的，已经成为组织修复研究中受到人们广泛关注的入路。海洋生物体内含有众多的海洋生物活性物质，从海洋生物活性物质筛选新药及其先导体，是新药研究和开发的重要途径。SDY-08是本实验室从海洋生物中分离出来的一种活性成分，我们通过以下实验检测其对血管生成和创伤愈合的影响并初步探讨了其作用机理。方法：1.MTT法检测SDY-08对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelialcells，HUVECs)生长的影响。2.建立鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane，CAM)模型，检测SDY-08对CAM血管生成的影响。3.建立小鼠皮肤创伤模型，检测SDY-08对小鼠创伤愈合的影响。4.免疫组化法检测SDY-08对创伤周围组织血管内皮细胞VEGF表达的影响。5.蛋白免疫印迹法检测SDY-08对HUVECs细胞VEGF表达的影响。 结果：1.SDY-08可明显促进HUVECs细胞的生长，其诱导效果与SDY-08的剂量相关。终浓度为10、20、40和80μg/ml的SDY-08作用HUVECs细胞24h，其细胞增值诱导率(Promotion rate，PR)分别为7.8％、23.4％、79.2％和115.6％。终浓度为80μg/ml的SDY-08作用HUVECs细胞12h、24h和36h的细胞增值诱导率分别为28.1％、115.6％和81.4％。2.SDY-08能够诱导CAM血管的生成，并与剂量相关。SDY-08(30μg/胚/天×3)、SDY-08(60μg/胚/天×3)、SDY-08(120μg/胚/天×3)、SDY-08对CAM血管生成的诱导率分别为27.9、47.4、和70.9％。3.SDY-08显著促进小鼠创伤愈合。高剂量组第8天12只小鼠中有4只创伤愈合，而对照组第9天12只小鼠中才有1只愈合；经SDY-08处理的小鼠第11天创伤全部愈合，且愈合的创面平滑，而对照组创面长期结痂，第11天只有6只愈合，第12天才全部愈合；SDY-08高剂量组创面愈合平均时间为9.1±1.3 d，较对照组11.2±0.92 d提前2天，差异非常明显。4.SDY-08上调小鼠创伤周围组织VEGF的表达。实验组的小鼠创伤周围组织血管内皮细胞胞浆和胞膜VEGF表达呈阳性或强阳性，呈深棕黄色颗粒状，局灶性或弥漫性分布，而对照组大多数细胞VEGF表达呈弱阳性。5.SDY-08上调HUVECs细胞VEGF的表达，并与剂量呈正相关。结论：1.SDY-08能促进HUVECs细胞的生长，其作用效果与剂量成正相关。2.SDY-08能诱导CAM的血管生成，并与剂量成正相关。3.SDY-08具有促进伤口愈合的作用。4.SDY-08能够增强创伤组织血管内皮细胞VEGF的表达。5.SDY-08能上调HUVECs内VEGF的表达。6.SDY-08诱导HUVECs的增殖，CAM的血管生成和促进伤口愈合的作用与其上调血管内皮细胞内VEGF的表达密切相关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语

声明

引言

第一章SDY-08对HUVECs增殖的影响

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二章SDY-08对CAM血管生成的影响

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第三章SDY-08对小鼠创面愈合的影响

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第四章SDY-08对HUVECS内VEGF表达的影响

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第五章总结

1 本研究主要成果

2 本研究的意义

参考文献

血管内皮细胞生长因子功能及应用进展

致谢

导师简介及作者简历