不同脱毒方法对红江橙种性变异及脱黄龙病毒效果的影响

摘要

柑桔黄龙病的肆虐流行导致红江橙濒临毁灭,同时红江橙的嵌合特性也导致红江橙果实性状不稳定,严重影响了红江橙的发展。为此,建立一整套柑橘无病毒苗木繁育体系和明确红江橙在组培过程中是否会发生分离是亟待解决的问题。
　　 利用组织培养培育红江橙的败育胚以得到无毒苗；取成年感病茎尖和健康的红江橙的茎尖为试材,进行微芽嫁接得到无毒苗；采用离体茎段培养对红江橙进行快繁以及种质保留；对带毒材料和嫁接成活植株进行聚合酶链式反应(PCR)检测；用SSR分子标记技术鉴定红江橙茎段在组培过程中是否发生分离。主要的结果表明如下:
　　 1.本试验设想根据败育胚保持母本的特性,通过胚性愈伤组织培育出无毒苗。但经PCR检测,通过败育胚所得幼苗为橙,用败育胚培养无毒苗的设想不可行。
　　 2.红江橙离体茎段材料用1/200消佳净浸泡10min后,用无菌水冲洗数次,70％酒精处理1min,0.1％HgCl2处理15min,效果最佳,成功率达90％以上。
　　 3.通过改进的方法提高了茎尖嫁接成活率,倒“T”型法的嫁接成活率最低,只有10％,其次为横压法,为10.4％,成活率最高的为三角形法,成活率达到了28.6％,点插法成活率为20％.
　　 4.诱导红江橙离体茎段出芽的最佳激素组合为:MT+6-BA1.0mg.L-1+IBA0.5mg.L-1+GA30.5mg.L-1;败育胚通过胚性愈伤组织得无毒苗的激素组合为:MT+IAA0.2mg.1-1+6-BA0.5mg.1-1+ZT0.5mg.1-1。
　　 5.在试验中技术鉴定发现红江橙在组培过程中继续发生分离,依靠组织培养对红江橙进行快繁以及种质保留是不可行的。
　　 6.根据黄龙病病原的核苷酸序列设计PCR引物。脱毒前利用PCR对感病的红江橙进行检测。结果扩增到特异性电泳区带,这与设计的扩增片断一致,证明是感染黄龙病病原的植株。
　　 7.对嫁接成活苗进行了PCR未检测到黄龙病的病原,说明茎尖嫁接脱除黄龙病病原是有效的,可以为无病毒苗木的繁殖提供健康的接穗材料。
　　 本试验得出的结论,一是利用败育胚培育红江橙的无毒苗不可行；二是通过红江橙离体茎段保存红江橙的种质或进行快繁也不可行:三是在微芽嫁接中,点插法以及三角形法值得进行推广；四是利用微芽嫁接可以达到红江橙脱黄龙病病毒；五是采用正确的外植体消毒处理可以使污染率最大程度的降低。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

1 前言

2 文献综述

2.1 引言

2.2 柑橘黄龙病

2.2.1 前人对柑橘黄龙病的研究

2.2.2 柑橘黄龙病的鉴定方法

2.2.3 无病毒苗木的培育方法

2.3 红江橙的嵌合特性

2.3.1 红江橙的种性变异

2.3.2 植物嵌合体的特点

2.3.2 嵌合体的鉴定

2.4 本研究的内容与意义

2.5 本研究的技术路线

3.材料和方法

3.1 试验材料

3.1.1 红江橙败育胚组织培养材料

3.1.2 砧木

3.1.3 带毒茎尖微芽嫁接及快繁材料

3.1.4 茎尖嫁接试剂

3.1.5 检测引物及试剂

3.2 试验方法

3.2.1 植物激素及附加物对红江橙败育胚胚性愈伤组织诱导的影响

3.2.2 体胚诱导及植株再生

3.2.3 砧木苗的培养

3.2.4 成年态茎段的离体培养

3.2.5 茎尖嫁接

3.2.6 成活苗的移栽

3.2.7 离体茎段培养苗的遗传鉴定

3.2.8 柑橘黄龙病的PCR检测

3.3 试验统计方法

4.结果分析

4.1 败育胚组培条件优化及其对种性变异的影响

4.1.1 败育胚组培条件优化

4.1.2 败育胚组培对种性变异的影响

4.2 成年态红江橙茎段离体培养微芽嫁接条件优化及其对种性变异的影响

4.2.1 带病枝条的鉴定

4.2.2 不同灭菌方式的效果研究

4.2.3 诱导红江橙离体茎段不定芽最佳配方的探讨

4.2.4 不同嫁接方式对茎尖嫁接成活率的影响

4.2.5 茎尖嫁接苗的遗传鉴定

4.2.6 茎段培养幼芽嫁接移栽苗的黄龙病鉴定

5 讨论

5.1 柑橘败育胚培育无毒苗的研究

5.2 成年态离体茎段的培养时污染的控制

5.3 提高红江橙茎段的不定芽的出芽率

5.4 提高茎尖嫁接成活率的技术

5.5 脱毒苗的检测分析

5.6 红江橙茎尖培养苗的嵌合性研究

5.7 本实验的创新点

参考文献

图版与说明

致谢

附录1 :MT(murashge and Tucker)培养基

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