一株溶藻细菌的分离鉴定及其对虾池两种蓝藻溶藻效果的研究

摘要

对虾养殖业是我国农业经济发展的重要产业之一。在养殖过程中,无机物、有机物的大量积累,导致养殖环境中一些有害藻类富营养化生长,严重破坏养殖水环境。藻类大量死亡产生的藻毒素等有毒物质,直接危害养殖动物。目前,改善对虾养殖生态环境,促进对虾养殖业的稳定健康发展,已成为水产养殖业共同关注的问题。溶藻细菌,作为水环境生物防治的一种生物,引起越来越多的人关注。
　　 本实验通过对固体平板溶藻方法的改良,从湛江市海滨公园土样中筛选分离出一株溶藻细菌,利用该溶藻细菌对对虾养殖环境中一些有害微藻进行溶藻试验,并对该菌株的溶藻特性,溶藻方式及环境因子对其溶藻效果进行了研究。实验结果如下:
　　 1、经形态观察、生理生化及16S rDNA鉴定结果表明,该菌株为革兰氏阳性杆菌,产芽孢、可运动；该溶藻细菌的16S rDNA核苷酸序列与与侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)的相似性最高,同源性大于97％。
　　 2、经固体平板和液体溶藻试验发现,该菌株既能在固体培养基上溶藻,也能在液体培养基中溶藻,具有较广泛的溶藻能力。
　　 3、菌液与藻液按不同比例混合共培养结果表明,当菌藻比为1:10(菌浓度约为105 cfu/mL)时,对颤藻和席藻叶绿素a的合成有促进作用；当菌藻比为1:2时(菌浓度约为107 cfu/mL)时,对颤藻和席藻叶绿素a的合成有较强的抑制作用；当菌藻比为1:1时(菌浓度约为109 cfu/mL)时,对颤藻和席藻叶绿素a的合成有很强的抑制作用。因此,菌液浓度保持在107 cfu/mL以上才有明显的溶藻效果。
　　 4、菌液经超声破碎、高温处理、离心沉降、0.22μm膜过滤后,与藻液进行共培养,均对颤藻和席藻叶绿素a的含量有显著影响(P<0.05),其中菌原液对颤藻和席藻叶绿素a的合成有较强抑制作用,其叶绿素a含量分别比其相应的对照组减少了74.18％、85.34％。经超声破碎和经高温处理后仍有较强的抑制作用,表明溶藻物质具有很高的热稳定性,为非蛋白类物质。因此,该菌株的溶藻方式为直接和间接共同作用方式,其中以间接溶藻为主。
　　 5、溶藻细菌分别对颤藻、席藻、微小亚历山大藻和条纹小环藻进行溶藻试验。实验结果表明,24 h内微小亚历山大藻藻细胞完全破碎,7 d后席藻和颤藻叶绿素a含量较对照组分别下降了91.45％,75.83％。该溶藻细菌对席藻、微小亚历山大藻有强烈的溶解作用,对颤藻有很强的抑制作用,对条纹小环藻无明显作用。因此,该菌株的溶藻具有种属特异性。
　　 6、三种光照条件下(光暗比分别为14h:10h、0h:24h、24h:0h),溶藻细菌对颤藻和席藻叶绿素a的含量影响显著(P<0.05)。Duncan多重比较表明,黑暗条件下对藻叶绿素a的合成抑制效果较其他光照条件好。因此,黑暗条件下,溶藻细菌对颤藻和席藻的生长抑制效果最好。
　　 7、不同温度条件下,溶藻细菌对颤藻和席藻叶绿素a的含量影响显著(P<0.05)。Duncan多重比较表明,温度为20～25℃时,溶藻细菌对藻叶绿素a的合成抑制效果明显高于其他温度组。因此,20～25℃条件下溶藻细菌对颤藻和席藻的生长抑制效果较好。
　　 8、不同盐度条件下,溶藻细菌对颤藻和席藻叶绿素a的含量影响显著(P<0.05)。Duncan多重比较表明,盐度为20～25时,溶藻细菌对藻叶绿素a的合成抑制效果较其他盐度组高。因此,盐度20～25条件下,溶藻细菌对颤藻和席藻叶绿素a的合成抑制效果较好。