鹅TLR2-1、15基因的克隆、组织表达谱分析

摘要

Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)是一类重要的模式识别受体(pathogenrecognize receptors，PRRs)，通过识别保守的病原相关分子模式(pathogen associatedmolecular patterns，PAMPs)启动先天性免疫应答。Toll样受体不仅参与非特异性免疫(天然免疫)，也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。为解析Toll样受体在鹅抗感染免疫中的作用机制，并为抗病育种积累可供选择的基因素材，本研究以马岗鹅为实验对象，采用RT-PCR、SMART-RACE及生物信息学分析技术，克隆了鹅TLR2-1、15全长基因，分析了其分子特征；qRT-PCR技术，定量分析了其在健康鹅体内各组织的表达谱。结果表明：
　　(1)鹅TLR2-1 cDNA序列全长3119bp，包括359bp的5’非编码区、378bp的3’非编码区和编码783个氨基酸的2382bp的开放阅读框，分子量为90.17kDa、PI为7.73。TLR2-1全长氨基酸序列包含1个信号肽、9个富含亮氨酸的重复序列(Leucine-rich Repeat，LRR)、1个跨膜结构域和1个胞内TIR结构域(IL-R1homologous region，TIR)。同源比对显示，鹅TLR2-1与其他已报道脊椎动物的TLR2-1具有较高的同源性(39.6-84.6％)。组织表达分析显示，TLR2在健康鹅的组织中具有较广的表达分布，其中在肾脏、法氏囊、皮肤、脑组织中表达量较高。
　　(2)鹅TLR15 cDNA序列全长2805bp，包括114bp的5’非编码区、93bp的3’非编码区和编码865个氨基酸的2598bp的开放阅读框，分子量为98.85kDa、PI为7.25。TLR15全长氨基酸序列包含1个信号肽、6个富含亮氨酸的重复序列、1个跨膜结构域和1个胞内TIR结构域。氨基酸结构分析、多序列比对和进化树分析都表明，TLR15与其他物种TLRs之间有较高的氨基酸相似性，与鸡TLR15的同源性最高(83％)。组织表达分析显示，TLR15在健康鹅的组织中具有较广的表达分布，其中在肌胃和肌肉组织中表达量较高。