噬菌体肽库技术筛选特异阻断恶性疟原虫感染红细胞粘附短肽的研究

摘要

该研究以能同时阻断ICAM-1与LFA-1及PRBC结合的抗ICAM-1Domain 1单抗15.2为靶,采用亲和筛选法对噬菌体随机12肽库进行三轮筛选,通过ELISA、竞争抑制试验、Dot-ELISA及Western blot等方法鉴定,获得与15.2抗体具有结合特性的噬菌体短肽.对阳性克隆进行DNA序列分析,推导其12肽的氨基酸序列并与ICAM-1氨基酸全序列进行了同源性比较.合成了其中一个与ICAM-1同源性最好的12肽KLYLIAEGSVAA,并用ELISA、竞争性ELISA等进行了特异性、亲和力鉴定.通过玻片免疫组化试验及粘附抑制试验等鉴定了阳性噬菌体展示肽与LFA-1及PRBC作用的生物学活性.以噬菌体展示肽KLYLIAEGSVAA为靶从噬菌体随机环7肽库中筛选其对应序列,以进行分子间相互作用的结构分析.

目录

缩略词

前言

第一部分噬菌体随机十二肽库的筛选

材料和方法

一、材料

二、实验方法

结果

一、原库库容鉴定

二、肽库的筛选及富集效果分析

三、ELISA筛选阳性噬菌体克隆

四、DNA及短肽氨基酸序列分析

讨论

小结

第二部分阳性噬菌体亲和力及生物学活性鉴定

材料和方法

一、材料

二、实验方法

结果

一、噬菌体展示肽的特异性、亲和力鉴定

二、噬菌体展示肽的生物学活性鉴定

讨论

小结

第三部分ICAM-1表位模拟肽的合成与鉴定

材料和方法

一、材料

二、实验方法

结果

一、合成肽-BSA交联物与15.2抗体的反应性鉴定

二、P1合成肽对15.2抗体与ICAM-1分子结合的竞争抑制作用

三、合成肽对阳性噬菌体克隆与15.2抗体结合的竞争抑制作用

讨论

小结

第四部分阳性噬菌体展示肽对应结合序列的筛选

材料和方法

一、材料

二、实验方法

结果

一、肽库的筛选

二、ELISA鉴定阳性噬菌体克隆

三、噬菌体单链DNA的制备及DNA、氨基酸序列分析

四、竞争性噬菌体ELISA试验

讨论

小结

总结

参考文献

致谢

综述一脑型疟相关黏附因子

综述二创造性思维与噬菌体随机肽库技术

附录：博士期间论文发表情况

附图：噬菌体展示肽克隆DNA序列