EBV与TPA分别及协同处理CNE2细胞诱导基因表达差异的蛋白质组学研究

摘要

我们用EBV和TPA分别及联合处理鼻咽上皮细胞,比较细胞在EBV感染及TPA处理前后分子水平上的基因表达差异,从而寻找与它们的生物学性能相关的生物大分子,为阐明EBV感染及鼻咽癌发生的机理奠定基础.由于人正常鼻咽原代上皮材料来源很少,分离培养困难,传代增殖有限,无法满足实验的需要,并且有报道认为在正常条件下,EBV不能感染未转化的鼻咽部鳞状上皮细胞,因此我们拟选用鼻咽部低分化鳞癌上皮细胞株CNE2进行研究.根据前人的工作经验,感染与未感染的细胞间接解培养及感染的方式是目前发现的新的EBV感染方法,因此我们选用该法用于感染试验.EBV感染及TPA作用的实验细胞分为四组,即未作任何处理的CNE2,EBV处理的CNE2,TPA处理的CNE2,EBV和TPA联合处理的CNE2,分别同步培养处理,然后用于后续实验.为了揭示CNE2细胞在EBV感染及TPA处理前后生物学特征变化的分子机理,我们采用了新一代鉴定基因表达差异的技术——功能蛋白质组学技术作为研究方法.

目录

前言

附：实验流程图

实验方法、材料及结果

一、细胞的培养、处理、感染及验证

(一)实验材料

(二)实验方法

(三)实验结果

二、蛋白质组学研究

(一)实验材料

(二)实验方法

(三)实验结果

讨论

一、接触感染是建立自然状态下EBV感染上皮细胞的模型的可行性方法

二、MALDI-TOF分析蛋白质肽质量指纹图谱是鉴定蛋白质的有效手段

三、已鉴定的差异蛋白的功能分析

（一）C4-6_15 P16949 STHM_HUMAN stathmin(phosphoprotein p19)

（二）C_4-7_12 p32119 PDX2_HUMAN thioredoxin peroxidase 1

（三）C4-7_17/C4-7_23 P06748 NPM_HUMAN nucleophosmin

(四)S4-7_16 P31947 143S_HUMAN 14-3-3 PROTEIN SIGMA(STRATIFIN)

(五)C4-7_2 P11021 GR78_HUMAN 78KDA glucose-regulated protein

(六）C4-7_7 P00938 TPIS_HUMAN triosephosphate isomerrase

(七)C4-7_7 P34962 PRCI_HUMAN proteasome iota chai和C4-7_16 P02571 ACTG_HUMAN actin cytoplasmic 2

（八）C4-7_24/C4-7_23 Q15293 RCN1_HUMAN reticulocalbin 1 precursor

（九）C4-7_20 P06468 TPM2_HUMAN tropomyosin

(十)C4-7_27 P10809 P60_HUMAN mitochondrial matrix protein plprecursor

(十一)S4-7_14 P05387 RLA2_HUMAN 60S acidic ribosomal protein p2

（十二）C4-7_10 Q96F30 Q96F39 similar to src homology 3 domain containing prortein HIP-55.homo sapiens(human)

四、EBV与TPA对CNE2分别和联合作用的一些蛋白质表达改变的综合分析

总结

参考文献

综述一：EBV与肿癌发生发展的关系

EBV感染与人类恶性肿瘤的关系

EBV基因组与致癌相关的主要基因

EBV感染细胞的机理

EBV的引起细胞转化的机理

参考文献

致谢