p53、Fas基因多态性与瘢痕疙瘩的相关性研究及基因检测试剂盒的初步构建

摘要

研究背景及目的：瘢痕疙瘩是一种创伤异常愈合过程的结果，表现为瘢痕组织过度增生，超出原伤口界限并向局部正常组织浸润生长，单纯切除后容易复发。由于瘢痕疙瘩具有独特的生长特性及临床表现，因此可视为一种创伤愈合后形成的良性肿瘤。现已证明成纤维细胞是瘢痕疙瘩形成的功能性细胞，其增殖-凋亡调控的失衡是导致瘢痕疙瘩不断增生而且难以退化的细胞学基础。 细胞凋亡是生物体维持组织自稳的主要调节机制，凋亡失衡与人类多种疾病的发生直接相关。细胞克隆性扩增及肿瘤生长是凋亡与增殖之间失去动态平衡的结果。凋亡减少一方面使已有基因异常改变的细胞逃避凋亡，另一方面使细胞因生存期延长而过度积累，增加了不稳定基因发生遗传学改变的机率，这是肿瘤形成及发展的重要机制之一。近年来对凋亡途径和调控机制的研究表明，细胞凋亡是多基因综合作用的结果。p53、Fas基因即是目前较为关注的与凋亡相关的基因之一。 p53基因位于人类17号染色体短臂13(17P13.1)约20Kb的区域上，编码一种分子量53kd的磷酸蛋白。p53蛋白是一个多功能的转录因子，具有肿瘤抑制功能，在细胞周期的调控、维持细胞基因组的完整性、诱导细胞分化和促使DNA损伤细胞修复及凋亡中起着重要的作用。p53基因和细胞凋亡有密切的关系。 瘢痕疙瘩作为一种复杂疾病，其发生是多步骤、多阶段、多因素参与的结果，对其凋亡相关基因进行多态性研究是瘢痕疙瘩疾病基因组学的重要内容。单核苷酸多态性，简称SNPs，是广泛分布于某一(些)群体、正常个体基因组DNA中的单碱基序列差异，分布频率大于1％，代表了不同个体之间最大的遗传差异。由于分布广泛，具有相当的遗传稳定性，SNPs研究逐渐成为生物学、遗传学等诸多领域如复杂性疾病病因研究、药物敏感性研究甚至人类进化史研究的主要工具。 位于基因调控区和编码区的单核苷酸多态(SNPs)会直接影响基因表达mRNA及蛋白质，并且改变它们的结构和功能，这是基因组中决定人类表型多样性的核心信息。SNPs在基因组中分布广、密度高，在不同种族间存在差异，目前尚未见汉族人群p53、Fas基因中SNPs与瘢痕疙瘩的关联分析。因此本研究采用聚合酶链反应-反向点杂交(PCR-RDB)、DNA直接测序技术检测广东地区汉族正常人群和瘢痕疙瘩患者人群中p53、Fas基因调控区和编码区序列，以期定位多个SNPs，分析SNPs在两类人群中的遗传特征，探讨这些多态性与瘢痕疙瘩发病的可能关系，从而达到为筛选汉族人群瘢痕疙瘩的易感基因或致病基因和探讨瘢痕疙瘩发病机制的目的，并进一步研制可用于遴选瘢痕疙瘩高危个体的基因检测试剂盒。 结论：1.广东地区汉族人群Fas基因7内含子中检测出1个未知的SNP，另外p53基因第72位密码子、Fas基因启动子-670位点多态在研究中得到了证实。 2.p53基因第72位密码子C等位基因及CC基因型可能是瘢痕疙瘩的易感因素，携带p53基因第72位密码子CC基因型患瘢痕疙瘩的危险性是CG或GG基因型的2.43倍。 3.p53基因第72位密码子多态性位点的基因型检测可能对判断瘢痕疙瘩高危个体具有指导意义。 4.p53基因检测试剂盒可以预测瘢痕疙瘩高危个体，对于临床诊断和治疗方面也有一定的指导意义。

目录

文摘

英文文摘

第一章前言

第二章p53、Fas基因中多态位点的检测

第一节 材料与方法

第二节实验结果

第三节讨论

第四节结论

第三章p53第72密码子、Fas-670基因多态性与瘢痕疙瘩关系研究

第一节材料与方法

第二节实验结果

第三节讨论

第四节结论

第四章初步构建瘢痕疙瘩高危个体的p53基因检测试剂盒

第一节材料和方法

第二节结果

第三节讨论

第四节结论

第五章参考文献

第六章附录

第一节 综述：人类单核苷酸多态性的研究进展及应用

第二节符号表

第七章成果

第八章致谢

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