DDFA对重症急性胰腺炎大鼠肝脏细胞凋亡及Bax，Bcl-2基因表达的影响

摘要

研究背景： 急性胰腺炎(acutepancreatitis，AP)是临床上一种表现凶险、死亡率高的急腹症之一，也是最易发生多器官功能障碍综合症(MODS)的疾病之一，并发MODS成为本病的主要死亡原因。重症急性胰腺炎(severeacutepancreatitis，SAP)不但累及胰腺，而且累及肝、肺及肾脏等远处器官。肝脏作为主要的受损器官，在病变加重时可发展成为肝衰竭，一旦肝功能衰竭发生，就会导致死亡。此外，由于其具有复杂的生理功能以维持机体内环境稳定，肝脏在AP病情发展中具有十分特殊的作用。方驰华首先应用DDFA方案治疗SAP取得明显效果，但是其作用机制并不明确。地塞米松属于糖皮质激素，具有抗炎、抗菌、抗休克、抗过敏等重要药理作用。低分子右旋糖酐是葡萄糖聚合物的胶体溶液，通过其胶体渗透压产生扩容、抗凝、改善微循环作用。5-Fu治疗AP的作用，主要是通过抑制胰腺外分泌而发挥作用的。抑肽酶可以明显降低急性胰腺炎血浆及胰组织匀浆内淀粉酶及脂肪酶浓度，且使胰腺的病理变化减轻，说明抑肽酶抑制了急性胰腺炎的高分泌状态，使胰腺的自身消化程度明显减轻。有研究表明AP大鼠发现肝细胞有凋亡发生，并且肝细胞凋亡可能是肝细胞功能衰竭的重要原因。细胞凋亡是受基因调控的，而细胞凋亡调控基因中最受关注的就是Bcl-2家族。DDFA治疗方案对大鼠SAP的肝细胞凋亡有何作用?相关的调控基因对肝细胞的凋亡又是如何调控的?此研究着重于观察DDFA治疗方案对肝脏细胞凋亡及凋亡调控基因的影响，探讨DDFA的作用机制。 目的： 探讨重症急性胰腺炎大鼠肝脏细胞凋亡和凋亡调控基因Bax和Bcl-2的变化及应用DDFA治疗对细胞凋亡和凋亡调控基因的影响，从而了解细胞凋亡在SAP肝脏损伤中的作用以及DDFA治疗SAP肝脏损伤的部分机制。 方法： SD大鼠57只，雌、雄不限，体重250g～300g。实验分组：假手术组9只；SAP组24只；DDFA治疗组24只。每组再分为6h、12h、24h三个时间点，假手术组每个时间点分配3只大鼠，SAP组和DDFA治疗组每个时间点分配8只大鼠。SAP组以胰尾被膜下穿刺注射50g/L牛黄胆酸钠诱导制作重症急性胰腺炎模型。DDFA组于模型诱发后，经颈静脉注射地塞米松(0.05mg/100g)+右旋糖酐(4ml/100g)+5-Fu(4mg/100g)+抑肽酶(5000U/100g)；假手术组仅牵拉胰腺。 各组在6h、12h、24h三个时间点处死大鼠，心脏穿刺抽血，进行BIL、AST、ALT测定；经原切口入腹取肝脏组织，以10％(100ml/L)中性缓冲甲醛液固定后，石蜡包埋，每蜡块行4μm厚连续切片。HE染色光镜下观察肝脏的病理变化。 采用DNA末端原位标记法(TUNEL法)，光镜下计算肝脏细胞凋亡指数(ApoptoticIndex，AI)。AI计算方法：数4个高倍视野，分别计算凋亡细胞数和总细胞数，AI=凋亡细胞数/总细胞数×100％；免疫组化SABC法检测肝脏组织中基因BaxBcl-2蛋白表达。统计学分析方法：实验结果计量资料值以-x±s显示，各组均数比较用完全随机设计资料的方差分析，SAP组与SO、DDFA组组间两两比较用Dunnett法，细胞凋亡与肝功能改变的关系用相关分析。P＜0.05为差异有显著性意义。统计软件采用SPSS10.0。 结果： HE染色后各组光镜下所见：假手术组未见异常；SAP组6h时肝脏轻度肿胀，肝脏细胞轻度水肿；12h时肝脏肿胀加重伴炎性细胞浸润改变；24h时肝脏可见局灶性或不规则片状坏死，肝窦及汇管区周围大量炎性细胞浸润及散在红细胞；DDFA组各时间点镜下所见均较SAP组减轻。 SAP时BIL、AST、ALT明显升高，且随着病程延长而逐渐增高；应用DDFA治疗后，BIL、AST、ALT下降，但仍有随着病程延长而逐渐增高的趋势。统计学处理SAP组与SO、DDFA组组间两两比较用Dunnett法有显著性差异(P＜0.05)。 TUNEL染色结果表明：SAP组凋亡细胞明显增多，凋亡指数升高，并随着病程延长而逐渐增高，DDFA组凋亡指数较SAP组明显下降。统计学处理SAP组与SO、DDFA组组间两两比较用Dunnett法有显著性差异(P＜0.05)。 假手术组Bax、Bcl-2基因的表达均较弱；SAP组Bax基因有表达，尚随着病程延长而逐渐增高，Bcl-2表达值随着病程延长而逐渐下降；DDFA组与SAP组比较，Bax基因表达明显下调，而Bcl-2基因表达明显上调。统计学处理SAP组与SO、DDFA组组间两两比较用Dunnett法有显著性差异(P＜0.05)。 相关分析显示细胞凋亡指数与肝功能指标变化(AST、ALT、BIL)呈明显正相关。 结论： SAP大鼠肝脏损伤至少部分是通过细胞凋亡机制引起的，即细胞凋亡是造成SAP肝脏损害的重要因素之一。 DDFA治疗大鼠重症急性胰腺炎可以明显地改善大鼠病变的肝脏组织形态和肝功能的水平； DDFA治疗重症急性胰腺炎的机制之一可能是阻止损伤的肝脏细胞调亡。DDFA的作用机制可能是抑制Bax基因表达，促进Bcl-2基因表达从而影响细胞凋亡实现的。

目录

文摘

英文文摘

前言

材料和方法

结果

讨论

全文小结

参考文献

附图

重症急性胰腺炎中肝脏损害机制研究进展

中英对照缩略词表

攻读学位期间的发表的学术论文

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