钩藤碱对甲基苯丙胺依赖的干预作用

摘要

甲基苯丙胺(methamphetamine，MA)是一种精神兴奋剂，它能够引起多种神经损害和行为学的改变。长时间甲基苯丙胺滥用可引起脑内多巴胺释放增多，从而产生各种神经损伤作用。但是目前人们对于MA药物依赖的具体机制尚不清楚。在本研究中，MA被证实能够使大鼠产生显著的条件性位置偏爱(conditionedplacepreference，CPP)，并且使大鼠脑内的N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)受体发生改变。免疫荧光技术分析证实了MA的滥用影响了脑内奖赏通路NMDA受体的表达，并且在不同脑区域的作用不同。腹腔注射1mg/kgMA使脑内中脑腹侧背盖区(ventraltegmentalarea，VTA)NMDA受体亚型pNR1S897(phospho-specificNR1subunitsatserine897)的表达增加，但使pNR1S897在尾状核(caudateputamen，CPu)和伏隔核(nucleusaccumbens，NAc)中的表达减少。体外实验中，MA对于神经细胞具有明显的神经毒性，其长时程作用能够使胞内钙离子浓度显著升高，与NMDA受体关系密切。 钩藤碱(Rhynchophylline，Rhy)为一种四轮环羟吲哚类生物碱，是从中药钩藤植物中提取的主要成分。钩藤碱能够通过血脑屏障发挥作用，最近研究推测其在体外具有NMDA受体非竞争性拮抗剂样作用。本课题就钩藤碱对MA位置偏爱效应及脑内pNR1S897表达的影响进行了研究。结果发现，提前给予钩藤碱(80mg/kg，i.p.)可以减弱1mg/kgMA腹腔注射所产生的CPP效应。而钩藤碱本身并不会使大鼠产生位置偏爱。与钩藤碱不同的是，非特异性NMDA受体拮抗剂氯胺酮(10mg/kg，i.p.)不仅本身能够使大鼠产生明显的CPP，而且提前MA注射能够加强MA的位置偏爱效应。免疫组化的结果也显示，钩藤碱能够拮抗MA所导致脑内不同区域pNR1S897的表达变化，而氯胺酮却使这种变化更加显著。实验结果提示，氯胺酮虽然是一种NMDA受体拮抗剂，但其在体内实验中可协同MA的作用，然而钩藤碱则显示了抗MA依赖的保护作用。 MA通过促进神经细胞的凋亡过程而具有一定的神经毒性。NMDA受体引起的钙离子内流与药物依赖及凋亡的信号转导通路皆有关。本文在体外原代培养的大脑皮层神经元中，证实了甲基苯丙胺具有很强的神经毒性，并能够使神经细胞内游离的钙离子浓度显著升高，且呈剂量依赖性。钩藤碱已知为一种钙离子通道的阻滞剂，以及钩藤碱所具有的NMDA受体拮抗剂样作用，可能与钩藤植物提取物具有神经保护和抗惊厥作用有关。MTT试验表明提前加入钩藤碱对MA孵育48h的神经细胞具有保护作用，而氯胺酮此作用不显著。细胞内钙离子Fluo-3/AM荧光探针检测发现，20μM浓度的氯胺酮即可使MA导致胞内钙离子浓度升高的神经细胞钙离子浓度显著性降低，而Rhy的这种阻滞钙离子内流的作用比氯胺酮更为显著。 总之，本研究表明钩藤碱具有NMDA受体非竞争性拮抗剂的作用，其本身不具有依赖潜能，但能够有效地拮抗MA依赖，对于MA滥用可能具有一定的治疗作用。同时值得注意的是，某些NMDA受体非竞争性拮抗剂例如氯胺酮，本身即有一定的滥用潜力且能够在某些方面增强精神兴奋剂的依赖作用。MA与非竞争性NMDA受体拮抗剂之间的相互作用以及Rhy治疗MA依赖的可能性有待于进一步的研究。 (1,138字)注：本论文中的所有数据均采用SPSS10.0进行分析。多组间比较采用单向方差分析(One-wayANOVA)，各组均数的多重比较采用最小显著差值法(leastsignificantdifferent，LSD)；不满足方差齐性要求时，采用Dunnett'sT3法。两配对组间比较采用配对样本t检验。

目录

摘要

CHAPTER 1 INTRODUCTION

CHAPTER 2 THE EFFECT OF RHYNCHOPHYLLINE ON THE ANIMAL MODEL OF METHAMPHETAMINE DEPENDENCE：CONDITIONED PLACE PREFERENCE TEST

CHAPTER 3 THE EFFECT OF RHYNCHOPHYLLINE ON PHOSPHO-SPECIFIC NR1 SUBUNITS AT SERINE 897 EXSPRESSION IN THE RAT BRAIN

CHAPTER 4 THE PROTECTION OF RHYNCHOPHYLLINE AGAINST METHAMPHETAMINE NEUROTOXICITY

CHAPTER 5 THE INHIBITION OF CALCIUM INFLUX BY RHYNCHOPHYLLINE IN METHAMPHETAMINE PRETREATED CORTICAL NEURONS

CHAPTER 6 DISUSSION AND CONCLUSION

APPENDIX

ABBREVIATIONS

REFERENCES

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ACKNOWLEDGEMENTS

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