血栓性心脑血管疾病血小板微颗粒及其膜功能蛋白表达关系的研究

摘要

目的： 建立以全血为标本的流式细胞仪(FCM)检测血小板微颗粒(plateletmicroparticle,PMPs)的方法，以FCM富血浆法检测PMP为对照，比较两种检测方法结果的差别。探讨血小板激活剂及不同标本处理方式对PMP及其表面膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa(PAC-1)及P-选择素(CD62P)表达的检测结果的影响。在此基础上观察血栓性心脑血管疾病患者治疗前后PMP数量及其表面膜蛋白PAC-1及CD62P的活化比率的变化。探讨PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P活化比率检测在血栓性心脑血管疾病发病机制中的作用，及其在病情预测和预后评价中的意义。 方法： 1.FCM全血法检测PMP、FCM富血浆法检测PMP及结果比较： 纳入20例健康人做为检测对象，抽血后将静脉血置于CTAD抗凝管中，每人采血两管，每管2.7ml。按检测方法分成a、b两组，a组用全血法检测，b组用富血浆法检测，并对结果进行比较。 2.不同浓度凝血酶作激活剂对结果的影响： 抽取20例健康人静脉血各2.7ml，分别以0.1U/ml、0.5U/ml、1U/ml三个浓度的凝血酶激活剂激活血小板，FCM全血法检测PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表达，并对结果进行比较。 3.两种方式处理标本对结果的影响： 抽取20例健康人静脉血各2.7ml。用两种不同方式对新鲜静脉血进行处理，并分别用FCM全血法检测PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1、CD62P的表达。 4.血栓性心脑血管疾病患者治疗前后PMP及其表面膜蛋白PAC-1及CD62P活化比率的检测： 将研究对象分组:血栓性心血管疾病组(40例)、血栓性脑血管疾病组(40例)及正常对照组(20例)。抽取两组患者及正常对照组的静脉血各2.7ml，置于CTAD抗凝管中，制成样本备用。用FCM全血法检测各组患者治疗前后PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表达，分析结果。 结果： 1.a组：FCM全血法检测组，PMP：64.27±8.24/104Plt、PAC-1：6.84±0.65％、CD62P：3.02±0.65％，平均完成检测所用时间：2±0.5h。b组：FCM富血浆法检测组，PMP：68.21±9.41/104Plt、PAC-1：8.01±0.21％、CD62P：3.98±0.87％，平均完成检测所用时间：3.6±0.5h。通过比较，两种方法所得的检测结果差异显著，有统计学意义，P＜0.05。 2.在不同浓度凝血酶激活剂的作用下，激活血小板，比较PMP及其血小板表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表达的结果的变化。各组结果比较均有显著性差异(P＜0.01)，随凝血酶浓度增高呈逐渐增加趋势。 3.全血标本4℃低温放置6h后制备检测的结果与当即制备检测的结果无显著差异(P＞0.05);24h后制备检测的结果与当即制备检测的结果有显著差异P＜0.05，72h后制备检测的结果与当即制备检测的结果有显著差异(P＜0.01)。PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表达均明显升高。全血标本制备后在4℃避光环境下放置4h、24h、72h后检测的结果与当即制备检测的结果无显著性差异(P＞0.05)，而96h后检测的结果开始有显著差异P＜0.05。 4.正常对照组：PMP：65.47±9.77/104Plt、CD62P：3.15±0.76％、PAC-1：6.97±0.95％；血栓性心血管疾病组治疗前PMP：209.23±21.92/104Plt、CD62P：54.69±7.81％、PAC-1：87.41±7.10％；治疗后PMP：117.90±11.87/104Plt、CD62P：25.15±6.33％、PAC-1：46.20±5.08％；治疗前PMPs、CD62P、PAC-1水平均较正常对照组有显著性升高P＜0.01；治疗后较治疗前有显著性下降(P＜0.01)。 结论： 1.FCM全血法检测PMP，标本更接近生理状态，具有快速、简便、灵敏度高的优点，并可避免血小板体外激活及PMP的丢失。 2.激活剂凝血酶浓度增加，PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表达也随之增加。 3.未当即处理的标本4℃低温存放6h内,PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表达受实验条件影响较小，结果稳定，无显著差异，检测有效。24h、72h后PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表达的有明显升高，结果差异显著。全血标本制备后当天及过夜24-72h，PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表达受实验条件影响较小，结果稳定，无显著差异，检测有效。96h后PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表达的有明显升高，结果有显著差异，无应用价值。 4.PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P在血栓性心脑血管疾病患者体内高度表达，明显高于正常对照组，具有显著性差异。在血栓性心脑血管疾病的发生过程中，血小板活化起重要的促进作用，其特异性标志物可作为该类疾病的临床辅助诊断指标。 5.临床治疗后患者症状缓解，体内PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表达明显下降，与未治疗组间存在显著性差异。PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表达的检测可作为血栓性心脑血管疾病疗效及预后判断的临床辅助诊断指标。 6.治疗后PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表达明显降低，但仍高于正常对照组，说明体内仍存在血小板活化刺激因素，为心脑血管疾病患者长期药物治疗提供了理论依据。 7.PMP的产生在血栓性心脑血管疾病中与表示血小板活化的血小板表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的特异性活化比率之间存在明显的正相关，PMP可以作为血栓性心脑血管疾病血小板体内活化的特异性指标之一。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分血小板微颗粒全血标本流式检测方法的建立及影响因素的研究

第二部分PMP在血栓性心脑血管疾病治疗前后的变化及其临床意义的研究

参考文献

全文结论

本研究创新之处

附录

文献综述

成果

致谢

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