小麦白粉菌诱导早期的基因表达分析

摘要

本文利用抑制差减杂交的方法构建了小麦抗白粉病的cDNA文库。以诱导的Mardler/Bainong3217BC5F7近等基因系为实验方，以其轮回亲本未诱导的Bainong3217为驱动方。根据本实验室李爱丽等对白粉菌侵染小麦细胞学的研究(PlantPathology,2005，Inpressed)以及相关文献我们确定了0.5、1、3、6、12、16、20hai(hoursafterinoculation，接种后小时)7个时间点为取材时间点。　　本文通过对本实验中基因表达的分析并结合相关文献可以看出，某些信号传导类，胞质转运类，转录因子类，次生代谢类，以及细胞结构类基因在多种植物材料和多种胁迫诱导中均有表达。这似乎暗示着植物对于外界环境胁迫的基础防御机制的一致性。最后，本研究针对24hr之前诱导表达的基因情况，对小麦抗白粉病可能的分子机制进行了初步的探讨。

目录

文摘

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论文说明：答辩委员会

独创性声明及关于论文使用授权的声明

第一章文献综述

1.1植物抗病性研究概况

1.1.1植物的抗病性

1.1.2植物抗病基因的克隆及其结构特点

1.1.3植物抗病机制及抗病信号传导路径

1.2小麦抗白粉病基因的研究进展

1.2.1小麦抗白粉病基因的研究背景

1.2.2小麦抗白粉病基因克隆的研究现状

1.2.3小麦抗白粉病机制的研究

1.3抑制差减杂交的原理和应用

1.3.1原理

1.3.2技术评价

1.3.3 SSH技术的应用

1.4立题意义和技术路线

1.4.1立题意义

1.4.2技术路线

第二章材料与方法

2.1植物材料及处理

2.2 RNA的提取

2.2.1总RNA的提取

2.2.2 mRNA的纯化

2.3 SSH文库的构建

2.3.1第一链cDNA合成

2.3.2第二链cDNA合成

2.3.3Rsa I酶切

2.3.4接头的连接

2.3.5第一次杂交

2.3.6第二次杂交

2.3.7两次PCR扩增

2.4 PCR产物的连接转化

2.5差减差异片段CDNA文库的构建

2.6插入片段检测

2.6.1质粒的提取

2.6.2 PCR扩增克隆的插入片段

2.7测序

2.7.1测序质粒的提取

2.7.2测序反应

2.7.3测序反应产物纯化

2.8测序结果分析

第三章结果与分析

3.1 RNA的检测

3.2酶切结果

3.3接头连接效率

3.4抑制性差减杂交结果

3.5差减杂交效率检测

3.6差减文库库容和插入片段的PCR扩增

3.7测序结果

3.8序列分析和功能注释

3.9与诱导24、48、72小时的差减文库的比较

3.9.1各类功能的基因所占比例的比较

3.9.2从抗病反应全过程来看两个差减库的差异

第四章讨论

4.1各种胁迫反应的共性

4.2抗白粉病识别机制初探

4.3SA信号途径在抗病反应作用中的可能性

4.4乙烯在抗病反应作用中的可能性

4.5 NPRl在抗病反应作用中的意义

4.6与泛素降解相关的可能机制

第五章结论

参考文献

致谢

作者简历