CELO禽腺病毒载体的构建及fiber 1部分片段的原核表达

摘要

本试验就是利用这一特性构建了复制型重组CELO病毒载体，另外根据fiber1的C端抗体结合区Knob-s区进行了原核表达。　　本研究构建了CELO病毒载体系统，期望能在体内外基因治疗中发挥作用，并为今后禽类腺病毒载体疫苗的进一步研究奠定了基础。另外表达了fiber1蛋白的免疫活性片段，可以为进一步建立CELO病毒的ELISA诊断方法，进行现地的血清学监测提供技术支撑。

目录

文摘

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论文说明：答辩委员会简介

独创性声明及关于论文使用授权的说明

1引言

1.1 CELO病毒概述

1.1.1CELO病毒的分类地位及发展历史

1.1.2 CELO病毒的形态、理化特性

1.1.3 CELO病毒生物学特性

1.1.4 CELO病毒的自然宿主和实验室宿主

1.1.5 CELO病毒的感染和复制机理

1.1.6 CELO病毒的检测

1.2 CELO病毒分子生物学研究

1.2.1 CELO病毒基因组结构及其编码蛋白

1.2.2 CELO病毒与其他腺病毒基因结构和功能的比较

1.2.3 CELO病毒与基因工程载体

1.3研究目的

2研究报告

2.1病毒毒株、质粒和细胞

2.2主要仪器

2.3试剂及其他材料

2.4 CELO病毒载体的构建

2.4.1 CELO病毒的复制增殖

2.4.2 CELO病毒在鸡胚肾细胞和鸡肾细胞传代

2.4.3 CELO病毒的粗提纯和病毒DNA的提取

2.4.4引物的设计与合成

2.4.5 Fc片段的PCR扩增及克隆

2.4.6碱裂解法提取质粒DNA

2.4.7质粒鉴定与测序

2.4.8重组质粒pTF-CMV-eGFP的构建与鉴定

2.4.9病毒DNA与转移质粒共转染

2.5 CELO病毒的fiber 1基因部分片段的原核表达及抗原性鉴定

2.5.1引物的设计与合成

2.5.2 fiber 1基因部分片段的PCR扩增及克隆

2.5.3重组质粒的构建

2.5.4表达载体的鉴定

2.5.5 fiber 1基因片段的诱导表达

2.5.6重组蛋白的Western blotting分析

2.6结果

2.6.1 CELO病毒细胞传代和鸡胚接种

2.6.2 Fc片段的PCR扩增及克隆的鉴定

2.6.3重组质粒pTF-CMV-eGFP的构建与鉴定

2.6.4病毒DNA与转移质粒共转染

2.6.5 fiber 1蛋白功能区分析

2.6.6重组原核表达载体的构建

2.6.7 SDS-PAGE检测重组蛋白

2.6.8重组蛋白的Western blotting检测结果

2.7讨论

3结论

参考文献

附 录

致 谢

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