拟除虫菊酯降解菌株分离及生化分子基础研究

摘要

本试验从常州农药厂排污口所采的土壤样品中分离得到了一株生长快，菌落规则，传代稳定，　　降解能力较高的细菌菌株，并对其进行了生化、分子生物学基础研究，结果如下：　　1.分离到的4-D菌株，根据Biolog试验和16SrDNA序列分析，初步鉴定为：Acinetobactersp.　　(不动杆菌)，该菌株在农药降解和微生物修复方面还未见正式报道。　　2.初步分离纯化了高效氯氰菊酯降解酶，并对其酶学性质做了研究。　　3.构建了4-D菌株基因组文库，筛选到1株对高效氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯表现出良好的降　　解活性的重组菌株，提取重组质粒进行酶切鉴定，结果发现：插入的外源片段约5kb。对外源片　　段进行测序，将所得的部分序列登陆www.ncbi.nlm.nlh.gov网站进行比对分析。该基因片段与　　Rhs家族蛋白编码基因同源性达到59％。但Rhs家族蛋白是否与拟除虫菊酯农药的降解有关有待　　于更进一步的分析研究。

目录

文摘

英文文摘

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第一章绪论

1.1拟除虫菊酯类农药简介

1.2拟除虫菊酯农药残留的现状

1.3农药残留的微生物降解

1.4拟除虫菊酯类农药微生物降解的研究进展

1.5研究中存在的问题及发展方向

1.6研究意义和目的

第二章拟除虫菊酯降解菌株的筛选、鉴定及降解能力检测

2.1材料与方法

2.1.1实验材料

2.1.2实验仪器

2.1.3试剂与培养基

2.1.4菌株的分离筛选

2.1.5菌株的鉴定

2.1.6菌株对农药降解率的测定

2.1.7 4-D菌株对农药的耐受浓度、生长曲线及最适生长温度、pH值

2.2结果与分析

2.2.1四种拟除虫菊酯农药的GC-ECD标准曲线及样品中农药浓度的计算

2.2.2菌株的初步分离

2.2.3菌株鉴定

2.2.4 4-D菌株生长条件的研究

2.2.5 4-D菌株对农药的降解广谱性研究

2.3讨论

第三章拟除虫菊酯降解酶的初步分离及酶学性质的研究

3.1材料与方法

3.1.1实验材料

3.1.2试验仪器

3.1.3试剂

3.1.4溶液

3.1.5降解酶在细胞上的初步定位

3.1.6酶液的制备

3.1.7拟除虫菊酯降解酶酶学性质的研究

3.1.8蛋白质含量测定方法

3.1.9降解酶的初步分离

3.1.10降解酶分离产物的电泳检测

3.2结果与分析

3.2.1降解酶在细胞上的分布

3.2.2蛋白质含量标准曲线

3.2.3降解酶的酶学性质分析

3.2.4降解酶分离纯化及SDS-PAGE检测

3.3讨论

第四章4-D菌株基因组文库的构建及重组质粒的筛选

4.1材料和方法

4.1.1菌株和质粒

4.1.2培养基

4.1.3试验仪器

4.1.4溶液及试剂

4.1.5实验方法

4.2结果与分析

4.2.1总DNA，pGEM-3Z质粒的提取

4.2.2 4-D菌株部分酶切条件的建立

4.2.3目的片段与载体的连接、转化

4.2.4受体菌Ecoli.JM109对高效氯氰的降解能力及其在平板上生长情况的检测

4.2.4重组质粒对菊酯农药的降解

4.2.5重组质粒1-2的酶切鉴定

4.2.6重组质粒中插入片段的序列测定及部分序列同源性比对

4.3讨论

结论

参考文献

致谢

作者简历

附1：几种菊酯类农药的相关信息

附2：发表文章 拟除虫菊酯农药残留的微生物降解