生物质谱技术在真菌源激活蛋白研究中的应用

摘要

本研究运用生物质谱技术对真菌源的蛋白激发子进行了鉴定与分析。该类蛋白激发子在交链孢菌(Alternariasp.)、纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)、黄曲霉菌(Aspergillussp.)、葡萄孢菌(Botrytissp.)、稻瘟菌(Magnaporthegrisea)、青霉菌(Penicilliumsp.)、木霉菌(Trichodermasp.)、镰刀菌(Fusariumsp.)等多种真菌都有发现，我们将其命名为激活蛋白。该类蛋白的分离、纯化和生物质谱分析国内外未见报道。本研究采用了MALDI-TOF，MALDI-TOF/TOF,microLC-ESI，nanoLC-ESI-IT-MS/MS等技术对Alternaria，Botrytis和Magnaporthe来源激活蛋白进行了分离，纯化，肽段序列测定和翻译后修饰鉴定。 肽指纹图谱(PMF)分析结果表明Alternaria来源激活蛋白是一类新的蛋白激发子。运用从头测序(denovosequencing)和串连质谱(MS/MS)等方法建立了一套测定激活蛋白的序列的生物质谱技术。测定了三种真菌来源激活蛋白部分肽段序列。 Alternaria来源的激活蛋白实现了微量蛋白的精确分子量测定，确定了均一化程度。在对来源于葡萄孢菌(Botrytis)激活蛋白的翻译后修饰分析中发现其存在泛素化。泛素化是一类重要的蛋白翻译后修饰，与蛋白转运和降解调节有关。 序列分析发现来源于Alternaria和Botrytis的激活蛋白部分序列与alpha-NAC蛋白中保守序列同源。alpha-NAC蛋白在新生多肽合成中起重要作用，还是重要的转录调控因子。保守序列DIELVM在三维结构上是alpha-螺旋。 对模式真菌Neurosporacrassa的蛋白组学研究鉴定了与结构，代谢调控，信号传导相关蛋白1467个。通过该研究，建立了蛋白组研究SDS-PAGE-nanoLC-ESI-IT-MS/MS研究体系，为下一步在蛋白组学层面研究激活蛋白及其与植物的相互作用打下了基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词与英汉对照、氨基酸精确分子量及结构、附图

基金来源声明、独创性声明及关于论文使用授权的声明

第一章引言

第二章激活蛋白纯化与精确分子量测定

第三章激活蛋白MALDI-TOF研究

第四章电喷雾离子源质谱研究蛋白质组技术体系的建立

第五章激活蛋白鉴定与序列分析

第六章结论

附录B激活蛋白序列质谱测定结果表

参考文献

致谢

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