荷斯坦牛脊柱畸形综合征检测方法的研究

摘要

脊柱畸形综合征(Complex vertebral malformation，CVM)，是一种发生在荷斯坦牛群中的常染色体致死性隐性遗传病。1999年丹麦学者报道该病的发生后，许多国家纷纷报道了CVM的发生。系谱分析的结果表明，在中国荷斯坦牛群中存在一定数量的潜在CVM携带者。目前，已报道了几种针对CVM的检测方法，如微卫星标记法、等位基因特异性检测法(AS-PCR)、创造酶切位点法(PCR-PIRA)等，但这些方法并不适合在中国广泛应用。 利用MAMA-PCR技术，本文建立了一种针对CVM致病基因的检测方法。通过AS-PCR法和序列测定验证，MAMA-PCR法被证明是一种准确可靠的针对CVM致病基因的检测方法。与已建立的CVM检测法相比，MAMAPCR法的操作更简单、准确性更高、成本更低廉。 利用MAMA-PCR检测法，本文对中国荷斯坦种公牛进行了群体水平的的检测，在154头被测个体中发现了24头CVM阳性个体，阳性率为15.6％。本试验表明，在中国荷斯坦种公牛中CVM携带者的比例可能已经达到一个比较高的的程度，应当对中国荷斯坦种公牛进行全面的检测。 为了解决母牛样品取样困难的问题，本文对利用血样、耳组织、毛囊和体细胞进行CVM检测的条件进行了摸索，建立了利用毛囊进行CVM检测的方法。利用毛囊对某CVM检测阳性公牛的女儿进行检测，在10头被测个体中发现了7头阳性个体。依据本研究的结果，建议对核心群母牛进行全面的检测。 本实验建立了一种适合在中国广泛应用的针对荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征致病基因的检测方法。

目录

文摘

英文文摘

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第一章 文献综述

1.1脊柱畸形综合征及其症状和影响

1.1.1脊柱畸形综合征的简介

1.1.2脊柱畸形综合征的症状

1.1.3脊柱畸形综合征的影响

1.2脊柱畸形综合征的致病基因及致病机理

1.2.1脊柱畸形综合征的致病基因的定位

1.2.2脊柱畸形综合征的致病机理

1.3脊柱畸形综合征检测方法的研究进展

1.4本研究的立体依据及意义

第二章 利用错配PCR突变分析技术检测荷斯坦牛CVM的研究

2.1 引言

2.2材料与方法

2.2.1材料与仪器

2.2.2实验方法

2.3结果与分析

2.3.1精液DNA模板的制备

2.3.2 PCR反应体系对PCR扩增的影响

2.3.3退火温度对PCR扩增的影响

2.3.4模板浓度对PCR扩增的影响

2.3.5荧光染料对检测结果的影响

2.3.6引物TS的特异性扩增

2.3.7引物TS和引物BS的扩增

2.3.8 PCR-PIRA法验证检测结果

2.3.9序列测定法验证检测结果

2.3.10检测

2.4讨论

2.4.1 引物TS的特异性扩增

2.4.2 MAMA PCR的特点和影响因素

2.4.3 试验初期遇到的问题

第三章 中国荷斯坦牛CVM的检测与分析

3.1 引言

3.2材料方法

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验方法

3.3结果

3.3.1 种公牛群体水平的检测

3.3.2针对荷斯坦母牛进行CVM检测的方法的建立

3.3.3利用血液、体细胞和耳组织检测荷斯坦牛CVM

3.3.4利用毛囊对荷斯坦牛CVM的检测

3.4讨论

3.4.1 对中国荷斯坦种公牛检测结果的分析

3.4.2母牛CVM检测方法建立的意义和母牛CVM检测结果的分析

第四章 全文总结

4.1 小结

4.2 建议

参考文献

致 谢

作者简历