犬α-干扰素的表达及其治疗犬病毒性肠炎临床疗效观察

摘要

犬细小病毒(Canine Parvovirus， CPV)为单链DNA病毒，基因组全长5323 nt，只含有3个读码框，分别编码为VP1(70～90ku)、VP2(62～76ku)和VP3(39～69ku)，其中VP2是构成衣壳蛋白的主要部分。它是一种自主性复制病毒，主要引起犬心肌炎、出血性肠炎和肺病变，并导致犬的大量死亡，给养犬业和宠物业带来巨大损失，因此早期预防和及时治疗十分重要。
　　 采用犬干扰素治疗犬病毒性疾病是一种有效的手段，干扰素通过阻断病毒的繁殖及复制，以及刺激动物产生足够的内源性干扰素达到消除病毒的作用，治疗犬病毒性肠炎具有良好的临床疗效。但由于犬干扰素价格昂贵，并且兽医们对它的认识仍然不够，目前，犬干扰素用于各种类型病毒感染犬治疗效果的大样本研究报道较少。因此本课题研究了犬的α干扰素，成功构建了pET32a—CaIFN—α重组质粒，并转入大肠杆菌BL—21中，经IPT6诱导后，表达出了重组犬α干扰素，表达产物为—N—端含His的37ku左右的融合蛋白。经薄层扫描分析目的蛋白表达量占菌体总蛋白的30％。Western blotting印迹证实了表达产物具有抗原抗体结合能力。并通过提取包涵体法和镍琼脂糖凝胶法对表达产物进行变性、纯化和复性，获得了纯度较高的重组犬α干扰素。
　　 另一方面，对犬α干扰素在临床上的应用进行了研究，研究犬均来自北京市昌平区动物疫病预防控制中心宠物门诊。对就诊于宠物门诊且患病毒性肠炎的犬542例，随机分成两组，对照组256例，予口服庆大霉素、思密达、纠正水电解质及酸碱平衡紊乱治疗。治疗组286例，在上述治疗基础上，予肌注干扰素—α(400万单位，1次/日，共5天)。结果，干扰素组退热时间、呕吐消失时间、腹泻持续天数和静脉补液所需天数，均比对照组明显缩短(P＜0.001)；脱水纠正所用时间比对照组短，但两组间比较无明显差异(P＞0.05)。通过本研究可以得出犬α干扰素治疗犬病毒性肠炎具有良好的临床效果。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略表

声明

第一章 绪论

1.1干扰素的研究进展

1.1.1干扰素诱导产生途径

1.1.2干扰素的三种效应途径

1.1.3干扰素的主要生物学特性及其生物学功能

1.1.4干扰素的基因工程

1.2犬细小病毒的研究进展

1.2.1犬细小病毒的生物学特性

1.2.2犬细小病毒的致病性和致病机理

1.2.3犬细小病毒病免疫预防程序

1.2.4犬细小病毒性肠炎实验室诊断技术

1.3干扰素在临床上的应用

1.4本研究的目的与意义

第二章 犬干扰素α基因的克隆及表达

2.1试验材料

2.1.1实验动物，载体，宿主菌

2.1.2培养基及主要溶液的配制

2.1.3酶与试剂

2.1.4主要仪器设备

2.1.5试验引物

2.2试验方法

2.2.1犬α干扰素基因的克隆、测序

2.2.2犬α干扰素在大肠杆菌中的表达

2.2.3大肠杆菌表达的犬α干扰素包涵体的制备、纯化及复性

2.3结果

2.3.1犬α干扰素基因的克隆、测序与表达载体的构建

2.3.2犬α干扰素基因的诱导表达

2.3.3免疫印迹分析

2.3.4重组pET32a-CaIFN-α蛋白的纯化

2.4讨论

2.4.1犬α干扰素基因的克隆和基因结构分析

2.4.2犬α干扰素原核表达载体pETIFN-α的构建及在大肠杆菌中的表达

2.4.3犬α干扰素基因表达蛋白的变性、纯化及复性分析

第三章 犬α干扰素在治疗犬病毒性肠炎上的应用研究

3.1试验材料

3.1.1供试动物

3.1.2药物与试剂

3.1.3研究资料的来源

3.2试验方法

3.2.1样本犬的选择

3.2.2样本选择标准

3.2.3犬细小病毒的临床诊断

3.2.4实验室诊断(胶体金试纸条)

3.2.5治疗

3.2.6观察指标

3.2.7疗效判断

3.2.8统计学处理

3.3结果

3.3.1胶体金试纸条检测结果

3.3.2治疗组退热时间、腹泻天数、呕吐症状消失时间、需静脉补液天数比较

3.3.3脱水纠正时间比较

3.4讨论

3.4.1干扰素可以干扰犬细小病毒的复制

3.4.2干扰素具有治疗犬病毒性肠炎良好的临床效应

全文总结

参考文献

致 谢

作者简历