口蹄疫病毒AF/72株结构蛋白VP1和H-2d限制性T细胞表位筛选与鉴定

摘要

表位肽疫苗作为一种新型疫苗,已成为口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)疫苗研究的热点之一。由于细胞免疫在口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)的免疫应答中发挥着重要作用,而结构蛋白VP1内又包含着FMDV的主要抗原位点。因此,筛选和鉴定VP1蛋白有效的H-2Ld限制性T细胞抗原表位,不仅可为进一步研究针对FMDV自然宿主的T细胞抗原表位提供方法和依据,也可为进一步研制FMDV表位肽疫苗奠定基础。
　　 本研究通过扩增并测序,获得了完整的FMDV AF／72株VP1序列。采用密码子优化表达方法,在大肠杆菌中高效表达了该VP1蛋白。经过SDS-PAGE电泳及Western Blotting检测,其分子量与预期大小相符合,并且保持了良好的免疫原性。与此同时,利用相关生物信息学软件对VP1中潜在的H-2Dd、H-2Kd、H-2Ld限制性T细胞表位进行了预测分析,初步筛选并合成了30个10肽片段作为候选表位肽段。将VP1蛋白免疫BALB／c小鼠,制备经VP1蛋白致敏的脾淋巴细胞,与30个候选表位肽段分别进行体外共培养刺激,经淋巴细胞增殖实验和γ干扰素ELISPOT实验,鉴定出2个H-2d限制性T细胞表位,即H-2Kd限制性T细胞表位pK1(AYHKGPFTRL)和H-2Dd限制性T细胞表位pD7(TGESADPVTT)。本研究筛选并鉴定了FMDV AF／72株结构蛋白VP1中的H-2d限制性T细胞表位,为FMDVT细胞表位的研究提供方法和依据,为进一步研制FMDV表位肽疫苗奠定了基础。此外,通过鉴定小鼠这一FMDV研究中常用动物模型的CTL T细胞表位,也有利于了解细胞毒性淋巴细胞在抗FMDV方面的作用。