宿主蛋白TvbS3对传染性法氏囊病病毒复制影响的研究

摘要

鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的主要危害雏鸡的一种急性、高度接触性、致死性传染病。IBDV主要侵害雏鸡的中枢免疫器官-法氏囊，感染后病毒粒子的大量复制导致B淋巴细胞的裂解和缺失，耐过鸡往往产生严重免疫抑制，进而引起疫苗免疫失败、增加对其它病原的易感性，严重危害养禽业的健康发展。
　　IBDV是双RNA病毒科、禽双RNA病毒属的典型代表，其基因组由A、B两个节段组成，A节段全长约为3200bp，B节段全长约为2800bp，共编码5种蛋白。其中VP2是IBDV主要的结构蛋白，是病毒衣壳的唯一组分，其分子表面携带有病毒的主要宿主保护性抗原，决定IBDV的细胞嗜性和毒力。病毒侵染宿主的第一步，是通过与细胞受体的互作而结合易感细胞。虽然已有几个蛋白被鉴定可影响IBDV的侵染，然而IBDV的细胞受体及其具体效应机制至今仍未被明确。
　　本研究首先提取鸡的B淋巴细胞膜蛋白，利用IBDV衣壳蛋白VP2的单克隆抗体通过免疫沉淀技术筛选互作蛋白。质谱分析结果提示，宿主蛋白TvbS3与IBDV可能存在相互作用；并且荧光定量RT-PCR结果显示，IBDV感染易感细胞DF1和SPF鸡后，细胞内TvbS3的转录水平均上调，提示TvbS3可能在IBDV感染过程中发挥重要作用。
　　TvbS3是禽白血病病毒B亚群（ALV-B）和D亚群(ALV-D)的受体蛋白，属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族，是Ⅰ型跨膜蛋白，其胞内区含有死亡结构域，通过与其配体或抗体结合后而被激活，能引起细胞凋亡。为了进一步验证TvbS3在IBDV侵染易感细胞过程中的作用，本研究克隆了鸡源TvbS3基因，并系统地从病毒蛋白表达和病毒滴度水平，研究了宿主蛋白TvbS3对IBDV复制的影响。结果显示，TvbS3上调表达促进IBDV复制，TvbS3被小分子干扰RNA(siRNA)敲低则抑制IBDV复制，这说明TvbS3是IBDV侵染的有利因子。本研究进一步真核表达了鸡源TvbS3蛋白，初步研究了其影响IBDV复制的分子机制。竞争性吸附抑制试验表明，真核表达的TvbS3蛋白能在一定程度上竞争性抑制IBDV吸附易感细胞。
　　本研究发现了一个新的在IBDV感染中起重要作用的宿主细胞膜蛋白TvbS3，该蛋白有利于IBDV在易感细胞中的增殖。初步探讨了其效应机制，TvbS3可能是IBDV细胞受体的重要组分之一。本研究对于进一步揭示IBDV的致病机制具有重要意义。

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第一章 引言

1.1 IBDV

1.2 IBDV细胞受体研究进展

1.3 蛋白质相互作用研究方法

1.4 宿主蛋白TvbS3

1.5 本研究的目的和意义

第二章 与IBDV互作的靶细胞膜蛋白的筛选

2.1材料和方法

2.2 实验结果

2.3 讨论

第三章 TvbS3对IBDV复制影响的研究

3.1 材料和方法

3.2 实验结果

3.3 讨论

第四章 TvbS3影响IBDV复制机制的初步研究

4.1 材料和方法

4.2 实验结果

4.3 讨论

第五章 全文结论

参考文献

附录

致谢

作者简历