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1.前言
1.1研究意义
1.2棉纤维发育过程
1.2.1纤维细胞起始
1.2.2纤维伸长
1.2.3次生壁增厚
1.2.4脱水成熟
1.3纤维强度的形成
1.4纤维次生壁增厚启始的信号
1.5纤维发育的分子基础研究
1.5.1国内外研究现状分析
1.5.2分离与棉纤维发育相关基因的研究策略
1.5.3分离与棉纤维发育相关基因的研究方法
1.5.4已分离到的与纤维发育相关的基因举例
1.6本研究的目标
2.材料与方法
2.1田间材料
2.2胚珠培养
2.3差异显示
2.3.1 RNA的提取
2.3.2 RNA的电泳检测和定量
2.3.3 RNA纯化
2.3.4反转录
2.3.5 DDRT-PCR
2.3.6变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.4差异片段的回收与再扩增
2.5第一轮Reverse Northern验证
2.5.1药品的准备和试剂的配置
2.5.2转膜
2.5.3探针标记
2.5.4杂交和洗膜
2.5.5信号检测和显影
2.6阳性片段的克隆
2.6.1感受态细胞的制备
2.6.2 DNA片段的连接
2.6.3转化
2.6.4重组质粒的PCR鉴定
2.7第二轮Reverse Northern验证
2.8测序及测序结果检索
3.结果与分析
3.1 RNA的提取
3.2 PCR扩增
3.3序列胶展示
3.4差异片段的回收
3.5第一轮Reverse Northern验证
3.6阳性片段的克隆
3.7第二轮Reverse Northern验证
3.8阳性片段的EST序列和检索结果分析
3.8.1 Ⅰ4的检索结果及分析
3.8.2 113、114的检索结果及分析
3.8.3 Ⅱ1的检索结果及分析
3.8.4 112的检索结果及分析
4.讨论
4.1 RNA的提取
4.2序列胶展示
4.3差异条带的回收
4.4两轮Reverse Northern验证
4.5五个阳性差异片段与纤维次生壁增厚启始
4.5.1 14与纤维次生壁增厚启始
4.5.2 113、114与纤维次生壁增厚启始
4.5.3 112与纤维次生壁增厚
4.5.4 Ⅱ1与纤维次生壁增厚
4.5.5结语
参考文献
致谢
