猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因在大肠杆菌中的克隆与表达

摘要

猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)是引发猪断奶后多系统衰弱综合征的主要病原.PCV-2 ORF2编码的结构蛋白具有型特异性抗原决定簇,因此它是区分PCV-1和PCV-2的重要抗原.根据已发表的PCV-2 ORF2基因序列,设计合成一对引物,经PCR方法扩增出了702bp的基因片段.将该基因片段插入到pGEM-T-Easy载体中,经酶切和测序鉴定,证明成功克隆了PCV-2ORF2基因.利用分子生物学软件对PCV-2 ORF2基因进行分析后,用PCR方法扩增了10个ORF2基因片段并插入原核表达载体pGEX-4T-1中,经酶切和PCR鉴定,证明成功构建了10个pGEX-PCV2ORF2基因片段的重组表达质粒.分别将各个重组表达质粒转化E.coli ER2566感受态细胞,经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导,PCV-2ORF2编码的蛋白片段在大肠杆菌E.coliER2566中以包涵体的形式得到大量表达.Western-blot免疫印迹表明,表达的10个重组蛋白中有9个能被PCV-2的单克隆抗体所识别.用含有2mol/L、4mol/L和8mol/L尿素的包涵体洗涤液多次洗涤包涵体后,用电洗脱方法对各个重组蛋白进行纯化,获得了理想的纯化效果.用纯化的各个重组蛋白建立了间接ELISA方法,并用建立的ELISA方法对PCV-2的攻毒猪进行抗体检测,结果表明有6个表达抗原具有良好的反应原性.

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文摘

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缩略词

第一章猪圆环病毒研究进展

1.1病原学

1.2流行病学

1.3PCV-2致病机理

1.4 PCV-2诊断技术研究进展

1.5 PCV-2的诊断与防制

1.6研究的目的与意义

第二章猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因在大肠杆菌中的克隆与表达

2.1材料

2.2方法

2.3结果与分析

2.4讨论

2.5结论

参考文献

致谢