血清2型鸭疫里默氏菌54KD外膜蛋白免疫原性研究

摘要

该研究经过超速离心法提取到血清2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白后,对其进行SDS-PAGE凝胶电泳分析其蛋白条带,外膜蛋白条带分子量主要为17KD、32KD、50KD、54 KD、74 KD、91KD、98 KD.通过对所提的外膜蛋白做免疫印迹反应,发现54 KD蛋白带阳性反应最明显,采用电洗脱法对粗提到的外膜蛋白进行SDS-PAGE电泳,然后切下含有54KD的凝胶带,再对其进行水平电泳,使外膜蛋白从凝胶中完全分离出来,经过多次收集后,将所得到的收集液进行SDS-PAGE电泳,证实所回收得到的蛋白为分子量54KD的外膜蛋白.将这些含54KD外膜蛋白回收液经蛋白含量测定后跟弗氏完全佐剂按1∶1体积比充分乳化,对8日龄雏鸭首免(蛋白量100μg/只)、首免后第14天进行二免(蛋白量100μg/只).分别在首免前1天,首免后第7、14天,二免后第7、14、21、28天采血,用建立的间接ELISA方法测定各次所采血清的抗体水平,结果发现经过首免后第14天可测到有抗体产生;二免后第14天抗体水平最高,平均效价达到640,第28天时平均抗体效价仍达到320.通过该研究可以说明:用从RA2外膜蛋白中提取到的亚单位成分(分子量为54KD的外膜蛋白)免疫鸭可以产生较高的抗体水平,从而证实其具有较好的免疫原性,为今后研究、开发亚单位疫苗提供方向和依据.该实验的第二部分是用RA1、RA2灭活菌加上油佐剂、蜂胶佐剂乳化后制成RA1油佐剂苗、RA2油佐剂苗、RA1+RA2二联油佐剂苗、RA1+RA2二联蜂胶苗四组全菌苗,分别用于免疫8日龄雏鸭,然后定期采血,用所建立的间接ELISA方法检测其抗体水平.然后对各组的抗体动态变化进行比较,发现油联苗的抗体效价比单价油苗的高,RA2菌的裂解上清液作包被抗原也能测到RA1油苗组的抗体,这可能是ELISA检测时对异型RA的抗体有交叉性的结果,在对RA1+RA2油联苗、RA1+RA2蜂胶联苗组的抗体动态做比较时,发现蜂胶联苗组产生抗体要比油联苗组的快,但油联苗组产生的抗体在高峰时明显比蜂胶联苗组的高.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

前言

第一章文献综述

第二章实验材料与方法

1实验材料

2实验方法

第三章结果与分析

第四章讨论

第五章结论

参考文献

致 谢

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