拟南芥扩张蛋白AtEXPA1基因的表达特性及其启动子顺式作用元件的初步分析

摘要

本论文通过RT-PCR的方法，研究了拟南芥扩张蛋白AtEXPA1基因的表达，发现AtEXPA1基因在叶片中的表达量远远高于根和花中，在不同胁迫处理下，AtEXPA1基因的应答不同，其中，干旱，低温(4℃)可以负调控基因表达。而水淹处理结果是随时间表达量增加，到5小时为最高峰。同时发现随着盐和脱落酸处理的时间增加，AtEXPA1基因表达量下降。 在研究AtEXPA1基因表达特性的基础上，克隆了AtEXPA1基因的启动子(翻译起始密码子的上游897bp)。首先将启动子在不同位置缺失，得到不同长度的片段，再连接报告基因GUS，构建了一系列缺失表达载体质粒。通过PEG介导法转化烟草原生质体。结果表明翻译起始密码子上游287bp长的启动子活性最强。转化原生质体后，不同条件和试剂处理原生质体，再定量检测GUS蛋白的活性，发现AtEXPA1基因的启动子上AAAG或CTTT与光调控有关，可能与Dof转录因子结合，在启动子上游-897到-626之间存在受冷负调控的元件，在-626bp和-282bp之间含有与NaCl调控有关的元件。-626bp和-444之间有与脱落酸负调控有关的元件。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章高等植物启动子的研究进展

1.1高等植物启动子的特点

1.2保卫细胞特异表达的启动子

1.3 Dof转录因子的研究

第二章扩张蛋白研究进展

2.1扩张蛋白的结构与分类

2.2扩张蛋白的作用机制与表达调控

2.3有关扩张蛋白AtEXPA1的研究

2.4研究意义和目的

第三章材料与方法

3.1实验材料

3.2常用溶液和培养基的配制

3.3实验方法

第四章扩张蛋白AtEXPA1基因的表达分析

4.1方法的建立

4.2 At-EXPA1基因在不同器官的表达分析

4.3 AtEXPA1基因在水淹胁迫下的应答

4.4 At-EXPA1基因在ABA处理下的应答

4.5 At-EXPA1基因在4℃胁迫下的应答

4.6 At-EXPA1基因在盐胁迫下的应答

4.7小结

第五章扩张蛋白AtEXPA1基因启动子的分析

5.1启动子的克隆

5.2启动子的序列分析

5.3缺失表达载体的构建和鉴定

5.4不同长度启动子的活性分析

5.5不同胁迫条件下启动子的活性分析

5.6与光有关的顺式作用元件分析

5.7与冷有关的顺式作用元件分析

5.8与ABA有关的顺式作用元件分析

5.9与盐有关的顺式作用元件分析

5.10小结

第六章讨论

6.1扩张蛋白AtEXPA1基因的表达特性

6.2AtEXPA1基因启动子的作用元件

结论

参考文献

致谢