交替假单胞菌（Pseudoalteromonas）CHS菌株产碱性蛋白酶的研究

摘要

本文采集连云港海域的贝类、海水、深海鱼类、海底沉积物等样品，筛选产碱性蛋白酶的菌株。从分离到的217株细菌中，获得23株碱性蛋白酶酶活高的菌株，对其中两株海洋细菌CHS和SY菌株进行生理生化和16SrDNA序列分析，初步鉴定为交替假单胞菌。以CHS和SY两株菌为出发菌株，研究它们发酵产碱性蛋白酶的条件，并分离提纯了CHS菌株产生的碱性蛋白酶，初步研究了其酶学性质。　　CHS和SY菌株最适产酶发酵条件为：15℃，24h，种龄16h，2.5％接种量，摇床转速180r/min；CHS菌株起始pH为9.0，SY菌株为pH8.0。葡萄糖，蛋白胨是两菌株发酵产酶较好的碳、氮源。　　CHS菌株发酵液经离心、硫酸铵盐析、透析、离子交换层析和分子筛层析后，酶的比活由59.4U/mg提高到860.8U/mg，提高了14.5倍，回收率为3.24％。在SDS-PAGE上显示一条带，达电泳纯，由SDS-PAGE初测分子量为56.9kDa。　　对CHS菌株碱性蛋白酶的性质研究表明，酶最适作用温度为40℃，最适作用pH为10.0，在40℃保温30min酶活下降约50％，热稳定性较差，在pH8.0-11.0有较好的稳定性。PMSF能强烈抑制酶的活性，而EDTA和IAA对该酶的抑制作用不太明显。Ca2+、Cu2+对酶有一定激活作用，Ag+对酶有抑制作用；酶对乙醇和尿素有较强的抗性，对吐温有一定抗性，SDS对其有抑制作用。

目录

文摘

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第一章文献综述

1.1海洋与海洋生物技术

1.2海洋微生物资源

1.2.1海洋微生物及其特点

1.2.2海洋微生物资源的利用

1.2.3交替假单胞菌

1.3碱性蛋白酶的研究

1.3.1碱性蛋白酶的类型

1.3.2碱性蛋白酶的用途

1.3.3国内外碱性蛋白酶研究的近况

1.4微生物低温蛋白酶

1.4.1低温蛋白酶的生理生化特征

1.4.2低温蛋白酶的结构特征

1.4.3低温蛋白酶菌种选育和研究方法

1.4.4分离自海洋的微生物产低温碱性蛋白酶

1.5研究目的、意义

第二章海洋细菌产碱性蛋白酶菌株的筛选和鉴定

2.1引言

2.2材料和方法

2.2.1材料

2.2.2方法

2.3结果与分析

2.3.1菌株筛选

2.3.2菌株生物学特性研究

2.4小结

第三章产酶发酵条件的研究

3.1引言

3.2材料和方法

3.2.1材料

3.2.2方法

3.3结果与分析

3.3.1菌株生长和产酶的温度和pH的研究

3.3.2培养条件对产酶的影响

3.3.3营养条件对产酶的影响

3.4小结

第四章碱性蛋白酶的纯化和酶学性质研究

4.1引言

4.2材料和方法

4.2.1试剂药品及仪器

4.2.2试剂及缓冲液

4.2.3方法

4.3结果与分析

4.3.1硫酸铵饱和度的确定

4.3.2酶的纯化过程

4.3.3酶的性质研究

4.4小结

第五章结论、问题与展望

参考文献

致谢

作者简历