云南矮马与北京油鸡成纤维细胞系建立与鉴定的研究

摘要

我国幅员辽阔，地大物博，拥有丰富的家养动物资源。随着高产专门化品种的培育与推广，畜禽遗传资源多样性及其种质资源丧失程度日益加剧。为了进一步探索体细胞保存在物种遗传资源保存中的应用，本研究采取云南矮马和北京油鸡这两种具有地方特色的重要家养动物组织，通过细胞培养及染色体、同工酶分析，绿色荧光蛋白转染、PrPc基因序列测定与分析，对建立的细胞系生物学特性进行系统研究，以期为日后的体细胞克隆、结构基因组、功能基因组等研究提供详尽的数据和理论依据。

目录

文摘

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引言

第一章文献综述

第一节畜禽遗传资源多样性及其保护

第二节畜禽遗传资源细胞库的建立

第三节Prion蛋白基因与种间屏障

第二章两种家养动物成纤维细胞系的建立

2.1材料

2.1.1实验动物材料

2.1.2主要仪器

2.1.3实验试剂

2.1.4主要溶液的配制

2.2方法

2.2.1细胞培养操作

2.2.2细胞冻存

2.2.3细胞复苏

2.2.4培养细胞形态学性状检测

2.3结果

2.3.1成纤维细胞体外培养形态学观察

2.3.2成纤维细胞冻存前及复苏后细胞活率

2.3.3成纤维细胞生长的动态观察

2.4讨论

第三章两种细胞系的鉴定与生物学特性研究

3.1材料

3.1.1实验材料

3.1.2主要仪器

3.1.3主要试剂

3.1.4主要溶液的配制

3.2方法

3.2.1染色体制备和分析

3.2.2同工酶电泳操作步骤

3.2.3微生物污染检测

3.2.4脂质体介导的细胞转染绿色荧光蛋白

3.3结果

3.3.1染色体分析

3.3.2同工酶分析

3.3.3微生物污染检测

3.3.4脂质体介导的绿色荧光蛋白(GFP)转染成纤维细胞结果

3.4讨论

第四章两种家养动物朊蛋白基因的扩增与分析

4.1材料与方法

4.1.1试验材料

4.1.2主要仪器

4.1.3主要试剂

4.1.4方法

4.2结果

4.2.1矮马朊病毒基因PCR扩增和测序

4.2.2北京油鸡朊病毒样基因PCR扩增与测序

4.3讨论

第五章结论

创新

参考文献

致谢

附录

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