环境低温诱发肉鸡肺血管重塑的细胞生物学机制研究

摘要

肺血管重塑以动脉中膜增厚为主要特征，是肉鸡肺动脉高压综合征(PHS)过程中的主要病理学变化，影响着肉鸡PHS发生发展的中心环节-肺动脉高压(PH)，在PHS发生发展过程中起着重要的作用。从细胞生物学角度看，血管平滑肌细胞增殖可能是动脉中膜增厚的原因，且细胞的增殖可能是原癌基因表达的结果。阐明环境低温诱发肉鸡肺血管重塑的细胞生物学变化对解读肉鸡PHS发生机制至关重要。故本试验在成功建立环境低温诱发肉鸡PHS模型的基础上，动态观察了环境低温诱发肉鸡PHS的过程中肺血管重塑、肺动脉血管平滑肌细胞的增殖及血管平滑肌细胞c-fos和c-jun表达的规律，同时观察了钙拮抗剂维拉帕米对环境低温诱发肉鸡PHS过程中以上指标的影响，从而对环境低温诱发肉鸡肺血管重塑的细胞生物学机制进行初步探讨。 1.以环境低温诱发肉鸡PHS，测定各组肉鸡肺动脉压、PCV、RV：TV和PHS发生率。结果显示：低温组肉鸡平均肺动脉压(mPAP)、PCV和RV：TV分别从从22、29和29日龄开始到50日龄显著或极显著高于对照组和维拉帕米组(P＜0.05或P＜0.01)；低温组肉鸡PHS发生率(18.75％)极显著高于对照组和维拉帕米组(1.25％)(P＜0.01)。这些结果表明环境低温明显诱发了肉鸡PHS的发生，维拉帕米明显抑制了环境低温诱发的肉鸡PHS的发生。 2.应用Weigert+VG染色法和图像分析法，测定各组肉鸡肺血管重塑情况。结果显示，低温组肉鸡各段肺动脉RMT％和RLA％分别从不同时间开始到实验结束显著或极显著高于和低于对照组和维拉帕米组(P＜0.05或P＜0.01)；低温组肉鸡MA％和PMA％都于36日龄开始到实验结束显著或极显著高于对照组和维拉帕米组(P＜0.05或P＜0.01)，NMA％于29日龄开始到实验结束显著或极显著低于对照组和维拉帕米组(P＜0.05或P＜0.01)。结果表明环境低温明显诱发了肉鸡肺血管重塑，维拉帕米明显抑制了环境低温诱发的肉鸡肺血管重塑。 3.应用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学法，测定各组肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞增殖情况。结果显示，低温组肉鸡各段肺动脉血管平滑肌细胞增殖指数于低温处理后不同时间开始显著或极显著高于对照组和维拉帕米组(P＜0.05或P＜0.01)，且低温处理期间，低温组肉鸡各段肺动脉血管平滑肌细胞的增殖指数与肺动脉中膜厚度显著或极显著相关(P＜0.05或P＜0.01)。结果表明环境低温诱发的肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞增殖与肺动脉中膜增厚密切相关，维拉帕米明显抑制了环境低温诱发的肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞增殖。 4.应用免疫组织化学法和原位杂交法，测定各组肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞c-fos和c-jun的表达情况。结果显示，低温组肉鸡各段肺动脉血管平滑肌细胞c-fos和c-jun在mRNA和蛋白表达从不同时间开始显著或极显著高于对照组和维拉帕米组(P＜0.05或P＜0.01)，且低温处理期间，低温组肉鸡20-50μm和50-100μm肺动脉血管平滑肌细胞c-Fos蛋白表达的阳性指数与细胞增殖指数显著相关(P＜0.05)，各段肺动脉血管平滑肌细胞c-Jun蛋白表达的阳性指数与细胞增殖指数显著或极显著相关。结果表明环境低温诱发的肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞c-fos和c-jun的表达参与了血管平滑肌细胞增殖的调控，维拉帕米明显抑制了环境低温诱发的肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞c-fos和c-jun的表达。 综上所述，环境低温诱发了肉鸡PHS和肺血管重塑。从低温组肉鸡PHS发生过程中发生的一系列变化及维拉帕米对此过程中变化的抑制来看，初步认为肺动脉血管平滑肌细胞增殖是肺动脉中膜增厚的主要原因，血管平滑肌细胞c-fos和c-jun基因的表达是调控血管平滑肌细胞增殖的重要因素，这两方面是环境低温诱发肉鸡肺血管重塑的主要细胞生物学机制。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文对照表

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述与试验设计

第二章环境低温诱发肉鸡肺动脉高压综合征

第三章环境低温诱发肉鸡肺血管重塑

第四章环境低温促进肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞增殖

第五章环境低温诱发肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞c-fos基因表达

第六章环境低温诱发肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞c-jun基因表达

第七章维拉帕米对环境低温诱发的肉鸡肺动脉高压综合征的抑制作用

第八章结论

参考文献

致谢

附图

个人简历