流产胎牛体内新孢子虫的鉴定及其生活史的初步研究

摘要

本研究在前期血清学调查的基础上，对新孢子虫血清抗体阳性母牛的流产胎牛进行组织病理学检查，结果发现，组织存在不同程度的病变，病变与文献报道的新孢子虫病病变一致，且在胎牛脑组织中观察到包囊样结构，通过形态学观察和免疫组织化学研究证实其为新孢子虫包囊。利用文献报道的新孢子虫特异性基因Nc-5的引物Np6和Np21，对流产胎牛脑组织提取的DNA进行PCR扩增，得到约328bp的目的片段，测序结果表明，此片段序列与已发表的新孢子虫Nc-1株序列同源性为98％。从而确认了新孢子虫病原在国内牛场中的存在，并且是引起牛流产的重要病原。 本研究观察了新孢子虫标准株Nc-1在Vero细胞中的生长发育过程。通过在不同的时间点对接种了新孢子虫的Vero细胞进行观察、取样、固定和染色，研究虫体在Vero细胞中吸附、侵入、增殖和释放的过程。结果显示，在接种后1h只有极少量速殖子侵入细胞，接种后3-6h为虫体侵入细胞的高峰，侵入细胞后的虫体以二分裂方式增殖形成裂殖体，完成一次分裂大约需要8-12h，接种72h时是虫体的释放高峰。释放的新一代速殖子重新侵入新的细胞进行新一轮增殖。 选用BALB/c小鼠做为实验动物模型研究新孢子虫标准株Nc-1在其体内的生长发育过程。对两组小鼠腹腔分别接种8×10<'6>个/只和5×10<'5>个/只新孢子虫后，观察临床症状并定时宰杀，取心、肝、肺、脑和后肢肌肉等进行组织病理学、免疫组织化学和PCR检测。结果发现两个感染剂量分别引起BALB/c小鼠的急性和亚急性感染，病理变化主要表现为各器官组织的广泛性出血，非化脓性脑炎和肝细胞空泡变性。最早在接种后第16d观察到脑组织内包囊，在其它组织中未观察到包囊结构。PCR检测结果显示，最早于接种后12h检测到肺脏和心脏组织内的新孢子虫特异性基因Nc-5，脑内最早于第8d检测到。接种25d后在肝脏、肺脏和脑内仍能检测到新孢子虫基因，结合病理变化的观察结果，可以发现虫体对肝脏、肺脏和脑组织有一定的组织亲嗜性。本研究还发现雄性小鼠对新孢子虫更为敏感。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

第一章文献综述

第二章犬新孢子虫在奶牛流产胎儿中的鉴定

1引言

2材料

3方法

4.结果

5讨论与分析

第三章新孢子虫在Vero细胞中培养、传代和发育的研究

1引言

2材料

3.方法

4结果

5.讨论

第四章新孢子虫在小鼠体内的发育、分布以及引起的病理变化

1.引言

2材料

3方法

4结果

5讨论

第五章结论

参考文献

致谢

作者简介