阳虚质膝骨性关节炎软骨组织Sox9、Col2al的表达研究

摘要

目的：通过检测膝关节软骨 Sox9、Col2al基因在阳虚质与平和质两者之间的表达水平，从分子、蛋白水平分析中医体质类型中阳虚质膝骨性关节炎患者体内Sox9、Col2al基因表达，比较膝骨性关节炎阳虚质与平和体质的Sox9及Col2al基因水平差异，探讨膝骨性关节炎中 Sox9、Col2al与中医体质的内在联系和规律，从中医体质学角度研究膝骨性关节炎的发生和发展规律与人体体质因素的相关性，深刻认识阳虚质膝骨性关节炎的发病本质，为中医体质学说预防和治疗阳虚质膝骨性关节炎提供理论参考。
　　方法：2012年10月20日—2014年12月27日，对甘肃省中医院关节骨科门诊及住院部确诊为膝骨性关节炎的患者进行中医体质问卷调查，同时调查、收集非膝骨性关节炎正常人群的一般资料。所有调查、收集均按统一设计的研究病例报告表逐项进行问卷调查。并于2014年2月1日—2014年12月28日，对甘肃省中医院关节骨科住院部确诊为膝骨性关节炎并做膝关节置换术的患者，在手术过程中，快速、无菌采集患者膝关节外侧软骨标本。取材均经患者及其亲属的知情同意，并获得甘肃省中医院伦理委员会的同意和认可。标本离体后，分别留取与病理取材部位相一致处的关节软骨组织，经玻璃化法后以最快的速度投入液氮中保存并统一存放于-80℃冰箱。标本取出后，对膝骨性关节炎患者进行数据统计后确定高发体质（阳虚质）与平和质膝骨性关节炎患者及阳虚质非膝骨性关节炎患者（对照组）标本 HE染色，在显微镜下观察不同体质 KOA患者软骨的病理改变，采取免疫组化及Real-Time RT-PCR的方法检测Sox9基因、Col2al在阳虚质膝骨性关节炎患者膝关节软骨细胞 mRNA及蛋白水平的表达，分析患者体内相关蛋白水平高表达与中医体质之间的关系，全部临床资料建成EXCEL数据库，统计分析采用SPSS17.0软件。
　　结果：在对实验结果进行分析后发现在不同体质的KOA患者中，阳虚质KOA患者中软骨内细胞排列紊乱，细胞聚集成团或者局部退化消失，Sox9在软骨细胞核中表达，Col2al在细胞外基质中表达，在平和质KOA、阳虚质非KOA患者软骨细胞内呈现高表达状态，在阳虚质 KOA相对平和体质表达比较低，两者的表达均有显著差异（P＜0.05）。
　　结论：膝骨性关节炎发病的体质危险因素主要为阳虚质。在分子表达水平Sox9及Col2al均呈现低表达，其与中医体质存在一定的内在相关性，说明体质因素是诱发膝骨性关节炎的高危因素，因人的体质是相对恒定的，某一疾病的诱发是具有时间性的，故阳虚质是膝骨性关节炎中诱导Sox9及Col2al低表达的主要因素之一。

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缩 略 词 表

第一章 前 言

第二章 立题依据

一 、 中医学说中历代医家对体质的认识

二、现代中医体质学的发展

三、中医体质与膝骨性关节炎相关性及中医体质与膝关节软骨Sox9基因相关性研究

第三章 Sox9基因在膝骨性关节炎不同体质中的病理学观察

一、材料

二、方法

三、结果判定

四、结果

五、讨论

六、结论

第四章Sox9、Col2al蛋白在不同体质膝骨性关节炎软骨细胞中的表达

一、材料

二、方法

三、结果

四、讨论

五、结论

第五章Sox9、Col2al基因在不同体质膝关节软骨细胞mRNA的表达

一、材料

二、方法

三、实验数据的评定

四、统计分析

五、结果

六、讨论

七、结论

全文小结

参考文献

附录：

附录1：调查研究表

附录2：伦理学证明

附录3：实验场地证明

附录4：病例调查及实验取材证明

附录5：实验相关照片

综述:膝骨性关节炎Sox9与中医体质相关性初探

致谢

攻读学位期间公开发表的论文：