肉用绵羊规模化胚胎移植生产技术体系的研究与应用

摘要

试验与生产实际相结合，对肉用绵羊超数排卵和胚胎移生产技术体系进行研究和应用，并对相关理论进行探讨。 1.用从新西兰引入的优良绵羊品种波德代羊和无角陶赛特羊进行试验。用FSH和PMSG进行超排，并分别用CIDR和阴道海棉栓对供、受体羊进行同期发情处理。波德代羊和无角陶赛特羊分别于撤CIDR后18.81±2.49h、18.59±2.45h开始发情，两品种间差异不显著，用CIDR和阴道海棉栓处理的受体羊分别于撤栓后46.32±18.96h、51.04±22.03h发情，从撤栓到开始发情的时间间隔差异不显著。 波德代羊和无角陶赛特羊的平均排卵数相近，但品种内个体间排卵数目差异很大，波德代羊排卵1～20枚，其中以排7～12枚的羊只数为最多，占52.73﹪，陶赛特羊以排卵1～26枚，其中以排1～6枚卵的羊数为最多，占52.38﹪。 重复超排结果表明，波德代羊和无角陶赛特羊第一次和第二次超排后所获得的平均胚胎数分别为7.00枚、5.62枚和8.00枚、9.08枚，其中有效胚胎分别占回收总数的61.90﹪、72.60﹪和87.50﹪、88.10﹪。 配种后7天从波德代和无角陶赛特供体羊上所冲取的胚胎，以桑椹胚为最多，分别占回收总胚的66.24﹪、75.78﹪。配种后8天从波德代和无角陶赛特供体羊上所冲取的胚胎，以扩展囊胚和孵出囊胚为最多，分别占从两品种羊上所回收总胚的38.92﹪、22.33﹪和25.89﹪、31.75﹪。绵羊经超排处理后，从波德代羊和无角陶赛特羊两侧子宫所获取的胚胎数目差异不显著，左侧获得胚胎数分别占总数的47.4﹪和51.9﹪，右侧分别占为52.59﹪和48.10﹪。 不同配种体系对超排供体羊配种结果表明，人工授精技术应用于绵羊的胚胎移植生产，能获得较高的受精卵数(平均受精卵数8.11枚)，显著高于本交与人工授精的不同组合的配种方法所获得的受精卵数(5.73枚和5.11枚)。相反，所获取的平均未受精卵数显著低于其他两种方法(0相对于1.88枚和1.15枚)。 两种超排方法所获得的超排结果表明，FSH减量注射4天、PMSG一次注射法(A)和FSH恒量连续注射4天、PMSG两次注射法(B)在波德代羊和无角陶赛特羊上所获得的平均胚胎数分别为7.44枚、6.42枚和8.17枚、9.08枚，其中有效胚胎分别占回收总胚胎的71.64﹪、78.57﹪和79.77﹪、82.11﹪。 2.增加移植胚胎的数目能显著增加受体羊的产羔率，移植时受体羊的黄体数目不影响其妊娠率和胚胎成活率。用胚胎分割仪二分胚切割胚胎，扩展囊胚移植成活率为53.33﹪。对与供体羊同期和非同期处理受体进行胚胎移植，表明，与供体羊同期处理的受体、比供体羊提前一天处理的受体、比供体羊晚一天处理的受体和比供体羊提前2天处理的受体移植胚胎后，移植单胚和双胚胎成活率分别为64.18﹪和55.44﹪、56.93﹪和33.33﹪、54.5﹪和43.33﹪、20.00﹪和16.67﹪。 不同发育阶段的胚胎移植成活率研究结果表明，供、受体同期处理，且供、受体发情同步差在0～12h内，移植后扩展囊胚和囊胚成活率分别为87.50﹪和82.35﹪，显著高于移植桑椹胚、8-C期的胚胎和孵出胚的70.19﹪、60﹪和44.44﹪。此组受体羊的妊娠率大于50﹪，高达94.74﹪。供、受体同步处理，发情同步差在12～24h内，移植后囊胚成活率为70.83﹪，高于移植扩展囊胚的60﹪、桑椹胚的50.67﹪、孵出囊胚的33.33﹪，其中移植囊胚后受体羊的妊娠率最高为66.67﹪。供、受体同步处理，发情同步差在24～36h内，移植后桑椹胚的成活率35.90﹪、囊胚23.08﹪，扩展囊胚为12.50﹪。供、受体同步处理，发情同步著大于36h，胚胎移植后，胚胎成活率均小于20﹪。 供、受体发情同步差的大小影响移植胚胎的成活率和受体羊的妊娠率。同期处理的供、受体羊进行胚胎移植后，均以发情同步差在0～12h内的受体羊妊娠率和胚胎成活率为最高，其值为75.94﹪和65.74﹪，其次为同步差在12～24h，受体羊的妊娠率和胚胎成活率分别为61.46﹪和55.88﹪；同步差大于24h以上，受体羊的妊娠率和胚胎成活率显著下降。 3.用放射免疫法测定相关激素、细胞因子和生化物质水平，不同组间所测物质含量的差异是预测超排效果的重要信息。配种日，超排无反应组羊血清中FSH水平显著低于超排有反应组和对照组(P＜0.05)，而雌激素水平却高于超排有反应组。超排无反应供体羊血清中孕酮水平的变化与超排有反应组的变化趋势相反，反映出卵泡发育的不同步而导致孕酮水平的变化不同。超排无反应组供体羊血清中IL-1β高于超排有反应组和对照组(P＜0.05)，而IL-6、TGF-α、IGF-Ⅱ低于超排有反应组和对照组。EGF在超排有反应组利超排无反应组的著异不显著(P＞0.05)，并且与LH的变化趋势相似。超排处理后，血清胆固醇含量下降，但超排有反应组和超排无反应组差异不显著。 通过对绵羊妊娠期(0、30、45、60、75、90、105、120、137天)激素及细胞因子水平的测定，结果表明，妊娠早期(妊娠45天左右)，早期流产受体羊血清中的FSH、LH、PRL、E2、EGF的水平显著高于胚胎移植妊娠成功受体和非胚胎移植妊娠成功绵羊(P＜0.05)，而孕酮水平却低于妊娠成功各组。血清胆固醇、钙在妊娠失败组低于妊娠成功组。其他细胞因子、生化物质在各组差异不显著。相关激素、细胞因子利生化物质在妊娠组与非妊娠组间存在差异性，这种差异为预测胚胎移植受体2情期后能否继续妊娠提供有价值的参考信息。 绵羊妊娠期，血清EGF-Ⅱ、胆固醇和钾在非移植妊娠绵羊血清中水平显著低于胚胎移植妊娠受体，血清葡萄糖高于胚胎移植妊娠受体，PRL在胚胎移植妊娠受体羊中30～45天期间低于非胚胎移植妊娠绵羊外，其他测定激素及细胞因子在妊娠前期(0～45天)和妊娠中期(45～90天)基本一致。上述差异可能与不同类型胚胎在母体内生长发育速度不同而影响母体相关物质分泌或代谢有关。 在现代规模化养羊生产实践中，建立了以“周密的组织管理+有效的供、受体同期发情和超排技术+可靠的供体羊配种技术+借助腹腔镜采卵技术+精湛的胚胎移植技术+供、受体羊良好的饲养管理”等技术措施为核心的规模化(供体绵羊100只左右)绵羊胚胎移植生产技术体系，技术先进可靠，完整配套，操作性强，能确保在生产实践中取得理想的胚胎移植效果和显著的经济效益，可在生产技术条件较好的企业和单位推广应用。

目录

文摘

英文文摘

序言

第一章综述

第二章绵羊超数排卵的研究

第三章绵羊胚胎移植效果的研究

第四章胚胎移植与几种激素、细胞因子及生化物质变化的研究

1.前言

2.材料与方法

3.结果与分析

4.讨论与结论

5.小结

第五章规模化绵羊胚胎移植生产的组织管理和操作规程

结论

致谢

参考文献

图版及图版说明

攻博期间发表论文及出版专著

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