ISSR标记的早熟禾遗传多样性分析

摘要

早熟禾（PoaL.）属植物全世界有500多种，我国早熟禾资源也比较丰富，有78种8变种，广泛分布于温带地区。因其具有较强的耐寒性、抗旱性，营养丰富、绿期长等特点，成为北方天然草地的优良牧草和建植草坪的主要草种之一。本研究以应用较为广泛的草地早熟禾、硬质早熟禾、冷地早熟禾、高原早熟禾、华灰早熟禾、野生早熟禾等31份材料为供试材料，应用ISSR分子标记技术，对早熟禾种质资源遗传多样性进行了研究，主要结果如下： 1．对Mg2+浓度、dNTPs、TaqDNA聚合酶等3个因素进行4个水平的正交优化设计，建立了早熟禾ISSR的最佳反应体系：25μL反应体系中1．25UTaq酶，1．5mmol·L-1Mg2+，10×PCRBuffer2．5μL，0．4mmol·L-1dNTP，1μL引物，1μLDNA模板。扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，引物退火30S，72℃延伸1min，循环35次；72℃延伸7min，4℃保存。在此反应体系下，可以得到重复性好、稳定且多态性高的条带。 2．在31个供试材料中，6条ISSR引物共扩增出111个条带，平均每个引物扩增出18．5条，平均多态性条带比率为97．79%。 3．利用NTSYS-PC软件计算供试材料的Jaccard遗传相似系数（GS），31份材料之间的遗传相似系数分布在0．4878～0．9512之间。 4．用POPGENE1．31分析软件早熟禾遗传多样性进行统计分析，结果表明：早熟禾的遗传距离变化范围为0．1301～0．5080。早熟禾物种水平平均等位基因数（Na）为1．9512，平均有效等位基因数（Ne）1．5208，平均遗传多样性指数（H）为0．3097，Shannon's指数（1）为0．4693。 5．通过非加权算术平均聚类（UPGMA）的方法，建立供试材料的系统树状图。3份早熟禾材料可以聚为5类，草地早熟禾品种间遗传相似系数较为相近，遗传差异小；草地早熟禾于其他早熟禾种间差异比较大，具有较高的遗传多样性。

目录

文摘

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前言

论文说明：缩略词表

声明

第一章文献综述

1.早熟禾种质资源概述

1.1早熟禾种质资源及其分布

1.2草地早熟禾品种资源概况

2.植物遗传多样性及研究方法

2.1遗传多样性及其意义

2.2遗传多样性的研究方法

3.早熟禾遗传多样性研究进展

3.1 早熟禾细胞学研究

3.2早熟禾生化标记研究

3.3早熟禾分子标记研究

4.早熟禾育种研究进展

第二章材料与方法

1.实验材料

2.试剂与仪器

2.1试剂及其来源

2.2主要仪器

3.引物合成

4.试验方法

4.1早熟禾基因组DNA提取

4.2 DNA浓度和纯度检测

5.ISSR-PCR反应体系的建立

5.1正交设计优化反应条件

5.2引物退火温度的确定

5.3多态性引物筛选

6. 31份早熟禾扩增产物检测

7.数据处理和统计分析

第三章 结果与分析

1.早熟禾基因组DNA提取与检测

2.ISSR反应体系优化

2.1正交设计直观分析

2.2引物最佳退火温度确定

3. 31份早熟禾多态性分析及指纹分析

3.1早熟禾多态性分析

3.2早熟禾指纹图谱分析

4.早熟禾遗传相似系数分析

5.早熟禾聚类分析

附表

第四章讨论与结论

1.讨论

1.1影响DNA质量的因素

1.2早熟禾ISSR-PCR反应体系

1.3正交优化法分析

1.4 ISSR标记的遗传多样性

结论

致谢

参考文献

附录

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