猪链球菌2型MRP-FBP串联黏附素的免疫保护力

摘要

猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，SS2）是重要的人畜共患病病原，主要引起脑膜炎、肺炎、败血症和突发性死亡等。溶菌酶释放蛋白（MRP）和纤维蛋白原结合蛋白（FBP）是SS2的两种粘附素。经DNAstar分析其基因序列，各选抗原性较强的片段，PCR扩增，单独及串连两片段构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-fbp和pET32a-mrp-fbp，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS-PAGE鉴定，表达蛋白的分子量分别为MRP47KD、FBP52KD、MRP-FBP80kD。MRP-FBP的Westernblot结果表明，重组蛋白可被SS2阳性血清所识别。免疫保护试验表明，串联表达的融合蛋白对Balb/c小鼠的保护率达80%，是目前为止筛选到的制备SS2亚单位疫苗保护力最高的短片段串联免疫原。

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声明

第一部分 文献综述猪链球菌2型研究进展

1病原学

2流行病学

3 SS2黏附机制

4细胞外基质

5 SS2的致病机理

6对猪链球菌毒力因子免疫保护作用的研究

7临床症状与诊断方法

8黏附素与基因工程疫苗

参考文献

第二部分 研究报告猪链球菌2型MRP-FB串联黏附素的免疫保护力

1材料与方法

1.1菌种和质粒

1.2目的片段的获得

1.3目的片段的A／T克隆与鉴定

1.4重组表达质粒pET32a-mrp、oET32a-fbp的构建

1.5串联表达载体pET32a-mrp-fbp的构建

1.6重组质粒的诱导表达

1.7表达产物的Western-Blot分析

1.8间接ELISA方法的建立

1.9免疫保护试验

2结果与分析

2.1目的基因片段的扩增

2.2 T／A克隆的鉴定

2.3重组质粒pET32-mrp与pET32a-fbp的筛选与鉴定

2.4重组质粒pET32a-mrp-fbp的RCR及酶切鉴定

2.5表达产物的SDS-PAGE电泳检测

2.6Western blot免疫印迹

2.7间接ELISA方法的建立

2.8免疫攻毒保护试验

3讨论

结论

参考文献

附录

致谢

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