食品中烟碱残留的色谱质谱联用分析方法研究

摘要

烟碱作为一种生物农药，具有安全、高效和广谱抗菌的特性。但食品中烟碱的残留对人体健康将产生严重危害，成年人的致死量是50～70毫克。2008年8月中国输出欧盟的26批牛肝菌中均查出有尼古丁残留，以致大量货品滞留码头，出口企业损失惨重。而目前食品中烟碱的残留检测方法还不能满足出口食品的质量要求。因此，深入开展食品中烟碱残留的检测方法研究，建立一套符合国际标准的食品中尼古丁残留的检测方法十分重要。
　　 本论文首先对尼古丁的提取，浓缩、和净化条件均进行优化。对常用的提取溶剂进行提取效率比较，结果表明5% NaOH溶液(W/V)、2%甲酸水溶液(V/V)、水、甲醇、丙酮、2%甲酸的甲醇(V/V)、乙腈、乙酸乙酯等8种常见提取溶剂对提取效率无明显差异；对浓缩过程中的酸碱性和浓缩条件进行比较，结果显示浓缩过程需在酸性条件下进行，而且使用平行蒸发仪的效果最佳；使用阳离子交换固相萃取(MCX-SPE)小柱进行净化，对上柱条件、洗脱液体积进行优化，结果表明采用2%甲酸水溶液载样并用10 mL5%的氨化甲醇作为洗脱液洗脱效果最好。
　　 实验分别采用液相色谱.质谱/质谱法(HPLC-MS/MS)和气相色谱-质谱/质谱法(GC-MS/MS)对尼古丁的检测方法开展研究。采用HILIC柱，用乙腈和乙酸胺进行梯度洗脱，选择离子扫描(MRM)模式、163.0>130.1、163.0>117.1离子对进行检测，在优化的HPLC-MS/MS条件下，方法的检出限为：5 ng/mL，线性范围为：5 ng/mL～1000 ng/mL。采用石英毛细管柱DB-17MS，程序升温模式，选择162>84、133>118为检测离子对，在优化的GC-MS/MS条件下，方法的检出限为：10 ng/mL，线性范围为10 ng/mL～1000ng/mL。
　　 利用所建立的HPLC-MS/MS法以及GC-MS/MS法分别进行实际样品中尼古丁残留量的检测。根据样品的基体采用不同的溶剂提取并进行相应的前处理，用HPLC-MS/MS法的检测，发现牛肝菌、羊肚菌、干香菇、茶叶、木耳、蜂蜜的检出限为为5μg/kg，鸡蛋、猪肉的检出限为2.5μg/kg，而胡萝卜、甘蓝等新鲜果蔬的检出限为1μg/kg；方法的回收率范围70%-110%，变异系数2.5%-10.2%。当采用GC-MS/MS法检测时，干香菇、茶叶、脱水洋葱、木耳，蜂蜜、鸡蛋、猪肉的检出限为10μg/kg，胡萝卜、甘蓝、蕃茄等新鲜果蔬的检出限为4μg/kg；方法的回收率范围70%-110%，变异系数1.13%-12.5%。实验结果表明，所建立的两种检测方法均能满足出口食品对尼古丁残留量的检测要求，且能满足“出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定(SN/T0001-1995)”中对回收率和精密度的要求。综上所述，本方法具有前处理简便，可操作性强，方法准确、可靠，适合于不同基体中尼古丁残留量的准确定量，可推广使用。

目录

文摘

英文文摘

第1章 引言

1.1 烟碱农药的性质和用途

1.2 日本肯定列表以及欧美等国对尼古丁的限量要求

1.3 国内外检测技术现状

1.4 主要研究内容及技术路线

第2章 液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)

2.1 实验部分

2.1.1 试剂与材料

2.1.2 仪器与设备

2.1.3 供试样品

2.1.4 前处理方法

2.1.5 添加回收试验

2.1.6 测定条件

2.1.7 结果计算

2.2 结果与讨论

2.2.1 提取溶剂的选择

2.2.2 浓缩条件的选择

2.2.3 净化条件的选择

2.2.4 液相条件的选择

2.2.5 质谱条件的选择

2.2.6 方法的线性及灵敏度

2.2.7 方法的特异性

2.2.8 方法的回收率与精密度实验

2.3 小 结

第3章 气相色谱-质谱/质谱法(GC-MS/MS)

3.1 实验部分

3.1.1 试剂与材料

3.1.2 仪器与设备

3.1.3 供试样品

3.1.4 前处理方法

3.1.5 添加回收实验

3.1.6 测定条件

3.1.7 结果计算

3.2 结果与讨论

3.2.1 质谱条件的选择

3.2.2 方法的线性及灵敏度

3.2.3 方法的特异性

3.2.4 方法的回收率与精密度实验

3.2.5 液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)与气相色谱-质谱/质谱法(GC-MS/MS)间的结果比较

3.3 小结

第4章 结论

致谢

参考文献