用于肿瘤治疗的新型光敏剂脂质体的制备及抗肿瘤活性研究

摘要

背景和目的:
　　 自从发现光动力疗法以来,人们对于光动力杀伤能力更强的新型光敏剂的研发从来没有停止过。本研究以中药蚕砂提取物为原料,第一次成功合成了新型二氢卟吩类光敏剂BCPDs,在这些衍生物中,产率最高且体外对肝癌细胞BEL7402杀伤最强的BCPD-18吸引了我们的注意,为了进一步提高它的肿瘤靶向性,本研究水解了BCPD-18的一个酯基,制备了BCPD-18的单酸化合物BCPD-18MA,化合物BCPD-18MA为已上市光敏剂维素达尔(注射用维替泊芬脂质体)的缮构类似物。由于该化合物憎水性极强,本研究通过制剂学的方法改变其亲水性质,制备了亲水性的脂质体制剂(L-BCPD-18MA)并研究了它的光物理性质,细胞药代动力学,亚细胞的定位,细胞凋亡的诱导,体内生物分布及药物代谢动力学及光动力抑瘤性质。
　　 实验方法:
　　 BCPD-18MA脂质体是采用薄膜分散法制备的,本研究通过不同时间测定在一定光剂量和光强度的激光照射下BCPD-18MA的紫外吸收光谱的变化来测定它的光稳定性;体外研究方面本研究采用人缘乳腺癌细胞MDA-MB-231作为实验模型,利用激光共聚焦显微镜通过BCPD-18MA的荧光分布以及细胞器荧光探针的荧光分布来判断BCPD-18MA亚细胞结构的分布,采用MTT实验法测定了BCPD-18MA对于细胞的暗毒性和光毒性,并通过细胞核的形态变化和细胞膜磷脂酰丝氨酸的外翻情况研究了它诱导细胞凋亡情况。在体内本研究采用路易斯肺癌荷瘤小鼠作为实验模型,通过观察化合物的组织分布和药代动力学特性来分析它的肿瘤靶向性及其在体内的代谢快慢。通过观察给药后小鼠脏器及肿瘤的病理学切片变化情况来分析化合物本身的毒性以及对于肿瘤的损伤情况。
　　 实验结果:
　　 光物理性质研究表明该化合物具有一定的光稳定性,L-BCPD-18MA能够迅速进入MDA-MB-231细胞,且主要分布在细胞的线粒体位置。L-BCPD-18MA介导的光动力治疗可以诱导细胞凋亡,与F-BCPD-MA(药物的DMSO混悬液,DMSO含量少于0.2％)及L-BPD-MA(阳性市售药物维替泊芬脂质体)相比L-BCPD-18MA的暗毒性明显较低,且体外展示了更强的光动力杀伤能力。
　　 路易斯肺癌荷瘤C57BL/6小鼠体内的组织分布及药物代谢动力学研究表明,化合物能够迅速从小鼠的主要脏器清除,而且相对于肿瘤周围皮肤中的化合物浓度,L-BCPD-18MA在肿瘤部位表现出一定的靶向性。体内抑瘤实验表明L-BCPD-18MA与L-BPD-MA有相当的光动力抑瘤能力。体内主要脏器的组织切片及光动力治疗后的肿瘤的切片表明,不用匹配激光照射,药物本身在高剂量5mg/mL(远高于治疗剂量)不会对小鼠造成伤害,肿瘤部位经光动力治疗后发生明显的坏死。