健脾化湿通络法调控胰腺纤维化关联的胰星状细胞活化及相关信号传导通路研究

摘要

中医“脾胃”，为气血生化之源，气机升降之枢，脾升胃降，气血调畅，气机不息，是人体内在平衡的重要调控机制，是阐明人体生命活动及其病理机制的中心环节，更是临证辨治疾病的重要依据之一，故有“脾胃为枢”之说。其内涵是包括了胰在内的，以消化为主，涉及免疫、神经、血液等多系统、多功能的综合单位，很多内伤疾病均可以从脾胃论治。而胰腺纤维化是脾胃消化系统的常见病及多发病之一，目前对于该病的治疗国内外尚未取得突破性进展，故能否从中医脾胃学说出发，探讨该病的发生、发展及其治疗具有重要的学术价值和临床意义。所以本文拟在脾胃学说的指导下，从中医传统理论及细胞微观水平两个方面阐释胰腺纤维化的病机及其治疗规律。
　　在理论研究方面，首先，主要从胰腺的实体解剖、功能以及胰腺纤维化的临床常见症状出发，明确了胰腺纤维化当归属于中医脾病的范畴。其次，从发病机理方面提出，“脾虚不运，湿阻脾络”是胰腺纤维化的主要病机特点。最后，针对该特点，重点阐明了健脾化湿法是辨治胰腺纤维化的基本大法，通络法是其重要配伍。
　　在实验研究方面，主要基于“胰星状细胞(PancreaticStellateCells，PSCs)的活化是胰腺纤维化形成的中心事件”，以活化的小鼠PSCs为研究对象，采用现代生物学技术观察了健脾化湿通络法对其活化增殖的影响，并进一步从分子水平探讨了其作用机制。首先，采用组织块培养法开展了原代小鼠PSCs的体外分离培养，通过对该细胞形态学、脂肪滴及骨架蛋白的观察，证实了所培养的细胞为目的细胞—小鼠PSCs，并成功复制了胰腺纤维化关联的体外细胞模型。其次，结合血清药理学方法，采用MTT法进行了药效学实验的观察，对健脾化湿通络法含药血清的最佳药物效应浓度进行了筛选，结果表明:健脾化湿通络法可以有效调控小鼠PSCs的活化增殖，具有抗胰腺纤维化的作用，10％是其最佳药物效应浓度。最后，基于“TGF-β1信号转导通路是影响细胞活化增殖的重要途径之一”，采用酶联免疫印迹吸附法对药物作用后的细胞上清液进行了TGF-β1检测及分析，结果提示:健脾化湿通络法可以有效抑制活化小鼠PSCs分泌和表达TGF-β1，从而从分子水平揭示了“健脾化湿通络法调控TGF-β1信号转导通路影响小鼠PSCs的活化增殖是其抗胰腺纤维化的作用途径之一”。

目录

声明

摘要

前言

第一章 理论研究

1 胰腺纤维化属中医脾病范畴

2 胰腺纤维化的病机主要责之于脾虚不运，湿阻脾络

2．1 脾虚不运是胰腺纤维化发生的重要病理基础

2．2 湿阻脾络是脾虚不运继发性的病理变化

3 健脾化湿法是治疗胰腺纤维化的基本大法

3．1 健脾化湿以固后天之本

3．2 健脾化湿以调气之升降

4 通络法是治疗胰腺纤维化的重要配伍

5 小结

第二章 实验研究

1 小鼠胰星状细胞的分离培养与鉴定

1．1 小鼠胰腺星状细胞的分离培养

1．2 小鼠胰星状细胞脂肪滴观察

1．3 小鼠胰星状细胞α-SMA骨架蛋白染色观察

1．4 讨论

2 胰腺纤维化关联的体外细胞模型的建立与复制

3 健脾化湿通络法及含药血清对小鼠胰星状细胞活化增殖的影响

4 健脾化湿通络法及含药血清对活化小鼠PSCs表达TGF-β1的影响

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述 胰腺纤维化发病机理研究进展

作者简历