强骨宝对疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎的作用及机制

摘要

目的
　　女性膝骨关节炎发病率高，机制不完全明了。本课题模拟女性膝骨关节炎的主要病因以建立新动物模型，并探讨强骨宝对于大鼠膝骨关节炎模型的治疗作用机制。
　　方法
　　1.建立疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型8周龄SPF级雌性SD大鼠24只，随机分为空白对照组，假手术对照组(sham组)和去卵巢组(ovx组)，每组8只。空白对照组正常饲养，sham组行切除卵巢周围脂肪组织术，ovx组行双侧卵巢切除术。手术恢复7天后，适应性动物实验跑台训练7天，10m/min，坡度-16°，共30min。之后，持续性下坡跑速度改为16 m/min，坡度-16°，100 min/次，间隔5min，2次/天。连续训练35天。取双膝关节股骨下端、胫骨下端行病理组织切片，通过HE染色，采用Mankin评分，光镜下观察细胞形态的变化;取腹主动脉血，行血清SOD、iNOS含量测定以鉴定膝骨关节炎模型成立。
　　2.强骨宝对疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎的作用观察8周龄SPF级雌性SD大鼠56只，随机分为空白对照组8只，对照组24只，强骨宝组24只。依据上述实验方法，对对照组及强骨宝组行双侧卵巢切除术及ZH-PT动物实验跑台运动训练，建立大鼠疲劳性膝骨关节炎模型。对照组及强骨宝组大鼠进行跑台训练35天后，强骨宝组每天灌服强骨宝汤剂，对照组和空白健康组给等剂量生理盐水，连续服用4周。分别于给药1w、2w、3w、4w后，对照组和强骨宝组各选取6只大鼠，腹主动脉取血。行血清SOD、iNOS、VEGF含量测定;双膝关节股骨下段、胫骨上段行病理组织切片，Mankin评分法评分;并取膝关节关节软骨行蛋白免疫印记杂交实验(Western Blot)，测定关节软骨中iNOS蛋白表达情况。
　　结果
　　1.建立疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型。
　　2.给药后，强骨宝组关节软骨损伤情况较同期对照组有所改善(P＜0.05)。给药第四周后，对照组关节软骨损伤Mankin评分6.333±0.516，为中度软骨损伤;而强骨宝组关节软骨表面平整，基质染色均匀，细胞较前增多，评分2.833±0.752，为轻度损伤程度，但与空白对照组软骨仍有差异(P＜0.05)。
　　3.强骨宝干预后，降低了大鼠血清中iNOS含量，并减弱关节软骨中iNOS蛋白表达。给药4W后，强骨宝组大鼠血清、关节软骨蛋白中iNOS含量较对照组显著降低(P＜0.05)。
　　4.给药后，大鼠血清中VEGF含量显著下降，并低于同一给药时间内对照组VEGF含量(P＜0.05)。强骨宝组及对照组血清中SOD含量均成下降趋势，但药物干预后，强骨宝组SOD含量下降趋势减缓，且SOD含量显著高于同一给药时间内的对照组(P＜0.05)。
　　结论
　　1.大鼠双侧卵巢切除结合疲劳运动创建的疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎新模型稳定性高，符合临床上中老年女性的膝骨关节炎病理改变过程。
　　2.强骨宝汤剂可抑制疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型中，关节软骨病变的发展。
　　3.强骨宝通过抑制iNOS、VEGF在模型大鼠体内的合成，阻碍关节软骨病变进一步发展。并通过减缓SOD含量下降的程度，促进大鼠膝骨关节损伤修复。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

实验材料

1 实验动物

2 药物

3 主要试剂

4 主要仪器设备

实验方法

1 建立疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型

1．1 制作去势大鼠模型

1．2 制作疲劳性损伤模型

1．3 疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型鉴定

2 强骨宝对疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎的作用观察

2．1 建立疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型

2．2 药物干预

2．3 动物取材

3 指标检测

3．1 Mankin评分法进行软骨损伤分级

3．2 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清iNOS、VEGF及SOD含量

3．3 蛋白免疫印记杂交(Western Blot)法检测关节软骨组织iNOS表达

4 统计学处理

结果

1 疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型鉴定

1．1 一般情况观察

1．2 关节软骨大体形态观察

1．3 关节软骨的组织学形态及Mankin评分

1．4 各组大鼠血清iNOS、SOD浓度比较

2 强骨宝对疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎的作用观察

2．1 膝关节软骨的组织学形态及Mankin评分

2．2 ELISA法测定各组大鼠血清iNOS、SOD、VEGF含量

2．3 Western Blot法测定各组大鼠膝关节软骨蛋白中iNOS表达

分析与讨论

1 疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型的建立

1．1 雌激素水平改变与膝骨关节炎形成

1．2 动物跑台运动对大鼠骨组织、软骨组织的影响

1．3 双侧卵巢切除术联合动物跑台运动建立大鼠膝骨关节炎模型

2 强骨宝对疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型的干预效果

2．1 膝骨关节炎相关发病机制

2．2 强骨宝对疲劳性损伤诱发去势大鼠膝骨关节炎模型干预效果

3 不足及展望

结论

参考文献

致谢

文献综述 国内外骨关节炎动物模型研究进展

作者简历